萬壽菊(Tagetes erecta)VIGS體系的建立與優(yōu)化.pdf

1、萬壽菊，菊科，萬壽菊屬，具有重要觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。病毒誘導(dǎo)的基因沉默技術(shù)，作為一門新興的技術(shù)，在植物基因功能研究中發(fā)揮著重要作用。本課題系統(tǒng)地建立了萬壽菊的VIGS體系，為其他菊科植物病毒誘導(dǎo)的基因沉默技術(shù)平臺的建立奠定了理論和技術(shù)基礎(chǔ)。本課題的主要研究成果有以下幾個(gè)方面:
　　(1)基于煙草脆裂病毒的萬壽菊VIGS病毒載體的構(gòu)建。成功克隆了417bp的萬壽菊PDS基因片段，并構(gòu)建了基于TRV系統(tǒng)的萬壽菊VIGS∷空載和VIGS

2、∷TePDS載體。
　　(2)子葉期萬壽菊植株的VIGS體系建立與優(yōu)化。以子葉期萬壽菊為實(shí)驗(yàn)材料，采用真空滲透的方法，獲得了TePDS基因沉默的植株。菌液濃度OD600值分別為0.5、1.0、1.5和2.0時(shí)，-25kPa的滲透壓強(qiáng)下，處理5min，子葉期的萬壽菊幼苗均可以達(dá)到良好的基因沉默效果;綜合評價(jià)真空滲透壓強(qiáng)(-25kPa、-50kPa和-100kPa)和滲透時(shí)間(2min、5min和10min)對子葉期轉(zhuǎn)化的影響，確定了

3、最適宜的滲透強(qiáng)度為-25kPa，滲透時(shí)間為10min。
　　(3)萬壽菊葉片VIGS體系建立的研究。將菌液濃度OD600設(shè)置為0、1.0、2.0和4.0，采用壓迫注射的方法處理第4對真葉，VIGS∷空載和VIGS∷ TePDS處理的萬壽菊植株葉片均出現(xiàn)泛黃的現(xiàn)象而無白化表型。
　　(4)萬壽菊花器官VIGS體系的建立與優(yōu)化。采用莖部注射、灌根和真空滲透的方法處理第4對真葉期的萬壽菊，并觀察葉片和花蕾的表型。灌根處理的無任何轉(zhuǎn)