抑癌基因DBC2多態(tài)性表達與乳腺癌臨床生物學(xué)行為關(guān)系的研究.pdf

1、目的:DBC2(deleted in breast cancer)是近年來在乳腺腫瘤中新發(fā)現(xiàn)的一個抑癌基因[1],該基因參與細胞周期調(diào)控、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運,細胞骨架的形成,細胞凋亡[2]、增殖與分化等重要生命活動[3]。越來越多的證據(jù)顯示這一基因的突變、異常表達或者啟動子的甲基化異常,蛋白質(zhì)的泛素化降解[4]等會導(dǎo)致細胞上述機能的改變并與腫瘤發(fā)生有關(guān),但國內(nèi)外未查到該基因多態(tài)性與乳腺癌發(fā)生學(xué)的關(guān)系的研究。本研究選取抑癌基因DBC2作為研究指標(biāo)

2、,通過檢測乳腺癌患者(病例組)與健康人群(對照組)外周血DNA中DBC2多態(tài)位點的基因型表達,分析其與乳腺癌臨床生物學(xué)行為的關(guān)系,目的是為乳腺癌的早期發(fā)現(xiàn)、治療以及判斷預(yù)后提供新的分子生物學(xué)指標(biāo)和靶點。
　　 方法:采用聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction PCR)和基因測序技術(shù)對104例乳腺癌患者(均為北方籍漢族婦女)和113例非腫瘤患者(均為北方籍漢族婦女)的基因組中DBC2基因DNA進行基因多態(tài)

3、性檢測,并分析其與乳腺癌患者的年齡、月經(jīng)情況、臨床分期、病理類型、組織學(xué)分級、腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、雌孕激素受體(Estrogen Receptor,ER;Progestogen Receptor,PR)表達水平、C-erb-B2表達水平之間的關(guān)系。
　　 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析采用SPSS12.0版軟件包(SPSS Company,Chicago,Illinois,USA)進行處理。對照組基因型頻率分布用X2檢驗;病例組與對照組的年齡差異采

4、用t檢驗,月經(jīng)狀況差異采用X2檢驗;基因型頻率分布比較采用X2檢驗,非條件logistic回歸計算相對風(fēng)險度比值比(oddsratio,OR)及95％可信區(qū)間(confidence interval,CI);病例組各臨床指標(biāo)與基因型分布的關(guān)系比較采用X2檢驗,Fisher's確切概率法,計算OR值及95％可信區(qū)間,以p＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.104例乳腺癌患者的年齡分布為20歲～84歲,中位年

5、齡52歲;113例對照組年齡分布為33歲～72歲,中位年齡47歲。兩組年齡分布無顯著差異(t=1.559;p=0.121)。
　　 2.病例組中絕經(jīng)者56人,未絕經(jīng)者48人,對照組中絕經(jīng)者45人,未絕經(jīng)者68人,兩組月經(jīng)狀況分布無明顯差異。(X2=0.183;p=0.669)。
　　 3.病例組中有13例患者的DBC2基因第5外顯子發(fā)現(xiàn)了新的錯義突變864C＞T(P.Leu288Phe),突變率為12.5％,對照組中5例

6、864C＞T突變,突變率為4.4％,兩組分布有統(tǒng)計學(xué)差異(x2=4.643;p=0.031),病例組DBC2.864C＞T堿基突變率高于正常對照組,OR值為3.086,有統(tǒng)計學(xué)意義,進一步表明DBC2.864C＞T與乳腺癌發(fā)病風(fēng)險正相關(guān)。
　　 4.按臨床分期進行分層分析發(fā)現(xiàn),44例Ⅰ期乳腺癌患者中有6例發(fā)生DBC2.864C＞T基因型突變,突變率為13.6％;36例Ⅱ期乳腺癌患者中有6例發(fā)生DBC2.864C＞T基因型突變,突

7、變率為16.7％;24例Ⅲ期乳腺癌患者中有1例發(fā)生DBC2.864C＞T基因型突變,突變率為4.2％;未發(fā)生基因突變型在Ⅰ期38例,86.4％;Ⅱ期30例,占83.3％;Ⅲ期23例,占95.8％。經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)處理,兩組基因型在臨床分期的分布中無統(tǒng)計學(xué)差異(X2=2.147;p=0.342),DBC2.864C＞T多態(tài)性表達與臨床分期無關(guān)。以Ⅲ期乳腺癌為對照,Ⅰ期和Ⅱ期乳腺癌的OR值分別為3.624(95％CI=0.411～32.107)和

8、4.600(95％CI=0.517～40.921)。
　　 5.按乳腺癌病理類型進行分層分析發(fā)現(xiàn),76例浸潤性導(dǎo)管癌中有10例發(fā)生基因突變,占13.2％;12例浸潤性小葉癌中有2例發(fā)生基因突變,占16.7％;16例其他類型癌中1例發(fā)生基因突變,占6.3％;而未發(fā)生基因突變型在浸潤性導(dǎo)管癌66例,占86.8％;浸潤性小葉癌10例,占83.3％;其他類型癌15例,占93.7％,兩組基因型分布無統(tǒng)計學(xué)差異(X2=0.792;p=0.6

9、73),DBC2.864C＞T多態(tài)性表達與病理類型無顯著相關(guān),以浸潤性導(dǎo)管癌為對照,浸潤性小葉癌和其他類型癌的OR值分別為1.320(95％CI=0.252-6.925)和0.440(95％CI=0.052-3.705)。
　　 6.將104例乳腺癌患者按腫瘤大小進行分層分析,發(fā)生基因突變型在T≤2cm組和T＞2cm組中分別為8例(13.1％)和5例(11.6％);未發(fā)生基因突變型分別為53例(86.9％)和38例(88.4％)

10、;經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)處理,兩組基因型分布無顯著差異(X2=0.051;p=0.821),DBC2.864C＞T多態(tài)性與腫瘤大小無關(guān),以T≤2cm組為參考,T＞2cm組的OR值為0.872(95％CI=0.265～2.873)。
　　 7.按腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移個數(shù)進行分層分析發(fā)現(xiàn),基因突變型在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中7例,占11.3％;在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中6例,占14.3％;未發(fā)生基因突變型在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中55例,占88.7％;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中36例

11、,占85.7％。兩組比較無顯著差異(X2=0.205;p=0.650)。以有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組為參考,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組OR值為0.764(95％CI=0.237-2.457)。
　　 8.按組織學(xué)分級進行分層分析發(fā)現(xiàn),基因突變型在分化Ⅰ～Ⅱ級組中12例,占13.8％;在分化Ⅲ級組中1例,占5.9％;未發(fā)生基因突變型在分化Ⅰ～Ⅱ級組中75例,占86.2％;在分化Ⅲ級組中16例,占94.1％。經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)處理,兩組基因型分布無統(tǒng)計學(xué)差異(Fi

12、sher值=0.689;p=0.330)。與未發(fā)生基因突變型相比,基因突變型與腫瘤組織分化程度無明顯相關(guān),OR值為0.391(95％CI=0.047～3.223)。
　　 9.按ER蛋白表達水平進行分層分析發(fā)現(xiàn),基因突變型在ER陰性組中2例,占10.5％;在ER(+)～(++)組中4例,占11.4％;在ER(+++)組中5例,占14.3％;ER表達不詳者2例,占13.3％;未發(fā)生基因突變型在ER陰性組中17例,占89.2％;在E

13、R(+)～(++)組中31例,占88.6％;在ER(+++)組中30例,占85.7％;ER表達不詳者13例,占86.7％;兩組基因型分布無統(tǒng)計學(xué)差異(X2=0.216;p=0.915),DBC2.864C＞T多態(tài)性與ER表達無關(guān)。以ER陰性組為參考,ER(+)～(++)組和ER(+++)組OR值分別為1.097(95％CI=0.182～6.618)和1.417(95％CI=0.248～8.107)。
　　 10.按PR蛋白表達進

14、行分層分析,基因突變型在PR陰性組中2例,占10.0％;在PR(+)～(++)組中4例,占9.1％;在PR(+++)組中5例,占20.0％;PR表達不詳者2例,占13.3％;未發(fā)生基因突變型在PR陰性組中18例,占90.0％;在PR(+)～(++)組中40例,占90.9％;在PR(+++)組中20例,占80.0％;PR表達不詳者13例,占86.7％。經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)處理,兩組之間基因型分布無顯著差異(X2=1.877;p=0.598)。DBC

15、2.864C＞T多態(tài)性與PR表達無關(guān)。以PR陰性組為參考,PR(+)～(++)組和PR(+++)組OR值分別為0.900(95％CI=0.151～5.370)和2.250(95％CI=0.387～13.067)。
　　 11.按C-erb-B2蛋白表達水平進行分層分析,基因突變型在C-erb-B2陰性組中1例,占5.0％;在C-erb-B2(+)～(++)組中3例,占6.1％;在C-erb-B2(+++)組中7例,占31.8％;

16、C-erb-B2表達不詳者2例,占13.3％;未發(fā)生基因突變型在C-erb-B2陰性組中13例,占86.7％;在C-erb-B2(+)～(++)組中46例,占93.9％;在C-erb-B2(+++)組中15例,占68.2％;C-erb-B2表達不詳者13例,占86.7％;經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)處理,C-erb-B2陰性組與陽性組的基因型分布差異顯著(X2=10.5322;p=0.015)。DBC2.864C＞T多態(tài)性與C-erb-B2表達水平正相關(guān)

17、,以C-erb-B2(+++)組為參考,C-erb-B2(+)～(++)組和C-erb-B2陰性組OR值分別為7.15(95％CI=1.641～31.206)和9.500(95％CI=1.046～86.261)。
　　 結(jié)論:
　　 1.DBC2.864C＞T基因多態(tài)性表達與中國北方婦女乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險呈正相關(guān);
　　 2.DBC2.864C＞T基因多態(tài)性與C-erb-B2的表達呈正相關(guān);
　　 3.DB