順鉑、SN-38對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖及凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、課題一 SN38抑制Akt途徑誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究 目的：體外研究SN-38對(duì)宮頸癌細(xì)胞系HeLa和SiHa的細(xì)胞毒性及誘導(dǎo)其凋亡的機(jī)制。方法采用MTT法測(cè)定SN-38對(duì)Hela和SiHa細(xì)胞增殖的影響；流式細(xì)胞儀和Hochest33258檢測(cè)藥物作用前后的細(xì)胞凋亡情況；WesternBlot測(cè)定p53、p21、Bax、Bcl-2、Akt和p-Akt蛋白水平的表達(dá)。結(jié)論SN-38抑制Hela和SiHA細(xì)胞生長呈時(shí)

2、效和量效關(guān)系；經(jīng)0.4μg/mlSN-38分別在12、24、36、48小時(shí)作用Hela和SiHa細(xì)胞，亞G1峰與對(duì)照組有顯著性差異；WesternBlot提示SN-38作用Hela和SiHa細(xì)胞后p53和p21蛋白水平表達(dá)逐步升高p-Akt蛋白水平表達(dá)逐漸降低，Bax、Bcl-2和Akt的表達(dá)無變化。轉(zhuǎn)染全長Akt1可減少SN-38對(duì)HeLa和SiHa細(xì)胞的細(xì)胞毒性。結(jié)果SN-38是通過p53介導(dǎo)的凋亡途徑及通過抑制Akt生存途徑殺傷腫

3、瘤細(xì)胞的。 課題二 順鉑誘導(dǎo)宮頸癌Hela細(xì)胞凋亡及其作用機(jī)制的研究 目的研究順鉑在體外誘導(dǎo)宮頸癌Hela細(xì)胞凋亡及其作用機(jī)制。方法采用MTT法測(cè)定順鉑對(duì)Hela細(xì)胞增殖的影響；流式細(xì)胞儀和Hochest33258檢測(cè)藥物作用前后的細(xì)胞凋亡情況；RT-PCR測(cè)定檢測(cè)HPVE6的mRNA水平表達(dá)；WesternBlot測(cè)定HPVE6、p53、p21、Bax、Bcl-2蛋白水平的表達(dá)。結(jié)果順鉑抑制Hela細(xì)胞生長呈時(shí)

4、效和量效關(guān)系；經(jīng)10μg/ml順鉑分別在12、24、36、48小時(shí)作用Hela細(xì)胞，亞G1峰與對(duì)照組有顯著性差異；RT-PCR提示順鉑作用Hela細(xì)胞后HPVE6的mRNA水平表達(dá)逐漸降低；WesternBlot提示順鉑作用Hela細(xì)胞后HPVE6的蛋白水平表達(dá)逐漸降低，p53、p21和Bax蛋白水平表達(dá)逐步升高，Bcl-2的表達(dá)無變化。結(jié)論順鉑隨著藥物濃度和時(shí)間的增加對(duì)Hela細(xì)胞的體外抑制效應(yīng)增加。順鉑通過抑制HPVE6的表達(dá)，恢復(fù)

5、p53的功能，引起細(xì)胞凋亡，起到殺傷腫瘤的目的。 課題三 順鉑誘導(dǎo)宮頸癌Siha細(xì)胞周期阻滯及凋亡的研究 目的探討順鉑在體外對(duì)宮頸癌Siha細(xì)胞周期和凋亡的影響及其作用機(jī)制。 方法采用MTT法測(cè)定順鉑對(duì)Siha細(xì)胞增殖的影響；DNAladder和Hoechst33258檢測(cè)藥物作用前后的細(xì)胞凋亡情況；流式細(xì)胞儀檢測(cè)藥物作用前后的周期阻滯和凋亡。WesternBlot檢測(cè)E6、p53和p21的表達(dá)。

6、 結(jié)果順鉑抑制Siha細(xì)胞生長呈時(shí)效和量效關(guān)系；經(jīng)10μM順鉑分別在12、24、36、48小時(shí)作用Siha細(xì)胞，亞G1峰分別與對(duì)照組有顯著性差異；順鉑能使Siha細(xì)胞發(fā)生G2-M期阻滯，24小時(shí)達(dá)到最高，凋亡開始。Hoechst33258實(shí)驗(yàn)組可見凋亡細(xì)胞；瓊脂糖凝膠電泳出現(xiàn)DNA梯形條帶。WesternBlot提示順鉑作用Siha細(xì)胞后HPVE6的蛋白水平表達(dá)逐漸降低，p53和p21蛋白水平表達(dá)逐步升高。 結(jié)論順鉑隨著藥物濃度