小麥耐鹽相關(guān)基因TaSX的克隆與分析.pdf

1、鹽脅迫是危害廣大農(nóng)作物的主要非生物脅迫之一，馮雪通過雙向電泳技術(shù)分離耐鹽突變體的根系全蛋白，得到6個(gè)差異點(diǎn)，經(jīng)MALDI-TOF-MS分析，推測可能是一些未知蛋白。通過Mascot和DNAStar軟件分析，發(fā)現(xiàn)其中5號(hào)點(diǎn)為水稻中的未知蛋白(unknown protein)，而且其分子量和等電點(diǎn)與膠圖信息基本吻合，可以作進(jìn)一步的研究。把該蛋白的所對(duì)應(yīng)的cDNA序列在NCBI進(jìn)行BLAST比對(duì)，搜索到與之同源性較高的小麥的EST，將所得到的

2、EST拼接，得到一段包含完整ORF的cDNA序列，然后采用RT-PCR進(jìn)行克隆并得到小麥耐鹽相關(guān)基因TaSX。分別用ABA，PEG，NaCl對(duì)小麥突變體RH8706-49的根進(jìn)行不同時(shí)段的脅迫處理，脅迫時(shí)間分別為0h、1h、6h、12h、72h，利用熒光定量PCR技術(shù)檢測TaSX基因在表達(dá)量上的相應(yīng)變化。同時(shí)為了研究該基因的功能，以克隆載體為基礎(chǔ)，構(gòu)建了雙元表達(dá)載體p1300-TaSX并與對(duì)照質(zhì)粒p1300一起轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌GV3101，采