家蠶絲膠基因啟動(dòng)子的克隆與活性分析及轉(zhuǎn)基因研究.pdf

1、家蠶絲腺是合成、分泌蠶絲蛋白的重要器官，具有強(qiáng)大的合成和分泌蛋白質(zhì)的能力。利用家蠶絲腺生物反應(yīng)器安全、高效地生產(chǎn)藥用蛋白具有實(shí)用的可行性和很好的應(yīng)用前景。 本實(shí)驗(yàn)以家蠶絲膠基因啟動(dòng)子ser-1、人胰島素樣生長因子hIGF-1、絲素基因輕鏈多聚腺苷酸信號(hào)、絲素基因輕鏈第一內(nèi)含子(增強(qiáng)子)以及新霉素抗性基因等為元件，通過多次克隆將它們插入到PigA3GFP轉(zhuǎn)座載體中。經(jīng)PCR、酶切鑒定及測(cè)序驗(yàn)證表明各元件已按照設(shè)計(jì)的方式插入到Pig

2、A3GFP轉(zhuǎn)座載體，分別構(gòu)建了由SV40啟動(dòng)子和IE-1啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的新霉素抗性基因所組成的PigA3GFP-hIGF-1.A和PigA3GFP-hIGF-1.B轉(zhuǎn)基因載體。 通過脂質(zhì)體介導(dǎo)法和精子介導(dǎo)法及基因槍法將轉(zhuǎn)基因載體分別導(dǎo)入BmN細(xì)胞和家蠶體內(nèi)，獲得發(fā)熒光的BmN細(xì)胞和家蠶幼蟲。我們確定用于BmN細(xì)胞篩選的G418的最佳濃度為700μg/mL～800μg/mL，并已經(jīng)對(duì)轉(zhuǎn)基因BmN細(xì)胞進(jìn)行了連續(xù)篩選，獲得比例較高的發(fā)熒光