牛白細(xì)胞介素2基因的克隆及原核表達(dá).pdf

1、根據(jù)GeIlBank發(fā)表的牛IL-2基因(M13204)序列設(shè)計(jì)并合成一對特異性引物，以經(jīng)ConA誘導(dǎo)的健康黑白花奶牛外周血淋巴細(xì)胞提取的總RNA為模板，用RT-PCRT方法擴(kuò)增出500bp大小的目的片段，將其連接到pMD 18-T Simple載體上并轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細(xì)胞，提取質(zhì)粒進(jìn)行鑒定并進(jìn)行序列測定。測序結(jié)果顯示，克隆的基因序列全長501個(gè)堿基，包含一個(gè)由465個(gè)堿基組成的完整的開放閱讀框，其編碼由155個(gè)氨基酸構(gòu)成的蛋白質(zhì)，此

2、基因序列與參考的牛IL-2基因序列同源性為99.8％，證實(shí)已成功克隆到黑白花奶牛的IL-2基因。 將克隆的黑白花奶牛IL-2基因正向亞克隆到表達(dá)載體pGEX-2T的相應(yīng)位點(diǎn)，構(gòu)建重組表達(dá)載體pGEX-BOIL2，轉(zhuǎn)化E.coli BL21感受態(tài)細(xì)胞，用lmM的IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。SDS-PAGE分析表明，經(jīng)誘導(dǎo)的重組菌在相對分子量約為43kD處有明顯的蛋白質(zhì)表達(dá)條帶，而未經(jīng)誘導(dǎo)的重組菌在43kD處無條帶產(chǎn)生。結(jié)果表明重組表達(dá)載