干細(xì)胞對重癥急性胰腺炎大鼠腸屏障保護作用的實驗研究.pdf

1、目的：
　　本文旨在通過建立大鼠重癥急性胰腺炎腸屏障損傷的動物模型，檢測觀察血清淀粉酶(AMY)、血清腫瘤壞死因子(TNF-α)、血清二胺氧化酶(DAO)水平，并觀察胰腺、小腸病理形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)的改變、小腸組織AQP-1蛋白表達的情況以及MSCs治療后上述指標(biāo)的變化，探討SAP時腸黏膜屏障變化的機理，觀察MSCs對重癥急性胰腺炎腸黏膜屏障的保護作用。從而尋求應(yīng)用MSCs治療重癥急性胰腺炎并發(fā)腸黏膜屏障功能障礙的理論依據(jù)。
　

2、　方法：
　　將54只雄性SD大鼠按隨機數(shù)字表分成3組：SO組(假手術(shù)組)、SAP組(重癥急性胰腺炎對照組)、SAP+MSCs組(間充質(zhì)干細(xì)胞干預(yù)組)，每組又分6、12、24、48h4個時間點，每個時間點有6只大鼠。采用4％?；悄懰徕c膽胰管逆行注射制備SD大鼠重癥急性胰腺炎動物模型(0.1 ml/100g)，MSCs組于模型制成后1h陰莖背靜脈注射MSCs(1*106個/100g)，SO組開腹后僅輕輕翻動胰腺和腸管后即關(guān)腹。在各組

3、相應(yīng)處理后，分別6、12、24、48h對各組動物采血行血清AMY、TNF-α、DAO測定，取小腸組織部分行快速冰凍，熒光顯微鏡下觀察CM-DiI陽性細(xì)胞；小腸組織測定組織中AQP-1蛋白表達的情況，并于光鏡下行胰腺和小腸組織病理學(xué)及超微結(jié)構(gòu)改變的觀察。
　　結(jié)果：
　　1. SAP組大鼠各時間點血清AMY、TNF-α、DAO水平高于假手術(shù)組(P<0.05)。與SAP組比較，SAP+MSCs組6h后各時間點血液TNF-α顯著下

4、降(P<0.05)，12、24h兩個時間點DAO活性均顯著降低(P<0.05)。
　　2.各時間點的SAP大鼠其胰腺及腸黏膜屏障功能損傷的程度存在區(qū)別，隨著時間的延長(從6h到24h)，胰腺及腸黏膜病理組織評分較正常明顯升高(P<0.05)。MSCs治療后于各時間點病理評分仍高于假手術(shù)組(P<0.05)，但較SAP組有顯著降低(P<0.05)。SAP+MSCs組小腸組織熒光顯微鏡下觀察可見CM-DiI陽性細(xì)胞。免疫組化結(jié)果顯示SA

5、P組于6h后各時間點AQP-1陽性表達弱于SO組，尤其在造模后24h表達最弱；而SAP+MSCs組于12h后各時間點的小腸AQP-1表達較SAP組有所增強。
　　結(jié)論：
　　1.采用膽胰管逆行注射4％?；悄懰徕c可成功制備大鼠SAP合并腸屏障損傷模型，此實驗方法穩(wěn)定，重復(fù)性好。
　　2.全骨髓差異貼壁法能夠獲得較高純度的MSCs。
　　3.重癥急性胰腺炎能夠引起大鼠全身性炎癥反應(yīng)，移植的MSCs能夠遷移并定居到受損