雞SIgA單克隆抗體的制備及初步應用.pdf

1、局部免疫對雞很多重要疾病的防控起重要作用。目前對局部免疫的效果尚缺少檢測方法，嚴重限制了對疾病的預防和控制。SIgA是局部免疫作用的最重要的免疫球蛋白。研制抗雞SIgA單克隆抗體，利用抗雞SIgA單克隆抗體建立IgA抗體的檢測方法，將對雞病的診斷和防治發(fā)揮重要的作用。 1.SIgA的提純：利用飽和硫酸銨法從膽汁中粗提雞SIgA，用Sephadex-G200和DEAE52進一步純化，SDS-PAGE電泳檢測其達到了電泳純，重鏈分子

2、量約為70KD。 2.兔抗雞SIgA多克隆抗體的制備：采用提純的雞SIgA免疫健康公兔2只，三次免疫后，獲得兔抗SIgA多克隆抗體，EIASA方法測得效價為1:10<'6>，用飽和硫酸銨法進行了提純。 3.單抗的制備和鑒定：采用提純的SIgA免疫Balb/c小鼠，四次免疫后用PEG2000融合，用建立的間接EIASA方法篩選，三次克隆后得到5株單抗，命名為lC4、1C5、1D5、1D6、1A1。對單抗進行了鑒定，結果表明

3、1C4、1C5、1A1株單抗亞類為IgG2b，1D5、1D6株單抗亞類為IgG1，輕鏈均為κ鏈，染色體數(shù)均介于96-110之間。5株單抗針對Sigh的親和常數(shù)均為10<'10>左右。細胞上清中單抗ELISA效價為1:10<'4>；腹水單抗ELISA效價為1:10<'6>。免疫印跡分析表明，單抗分別為針對SIgA重鏈和輕鏈的特異性單抗。 4.單抗的初步應用：利用制備的單抗，初步建立了檢測IgA總量的雙夾心ELISA方法和檢測IBD