EphB2與胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究.pdf

1、目的： Eph是已知最大的酪氛酸蛋白激酶受體家族。Eph受體及其膜附著配體ephrins在發(fā)育過程中呈現(xiàn)不同的表達(dá)模式。功能分析表明，該家族在包括神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)形成、神經(jīng)管和軸旁中胚層的成型(patterning)、細(xì)胞遷移和神經(jīng)軸突導(dǎo)向、血管發(fā)生等方面具有重要功能。Eph受體及其配體也與腫瘤發(fā)生有關(guān)，因此深入分析這些分子的功能特別是在腫瘤生長中的作用而應(yīng)用于臨床治療具有暈要的臨床意義。EphB2是Eph家族中的一員，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的

2、生長和分化，介導(dǎo)胞外信號向細(xì)胞內(nèi)部的傳遞，導(dǎo)致細(xì)胞遷移、聚集和靶向等生理效應(yīng)。EphB2是1994年Kiyokaw等從胃癌組織cDNA文庫中篩選出的Eph亞類中又一新基因，近來被發(fā)現(xiàn)其在大腸腺瘤和大腸腺癌中作用顯著，然而在胃癌發(fā)生發(fā)展中的機制仍然不明。既往研究EphB2在胃癌原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶中表達(dá)存在差異。研究該基因在胃癌中的表達(dá)以及與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系，可以進(jìn)一步闡明EPHB2基因在胃癌演變中的作用。另外，檢測EphB2在胃癌組織

3、中的突變及等位基因缺失情況對闡明胃癌的發(fā)生機制具有指導(dǎo)意義。 方法： 1.構(gòu)建含337例胃癌的組織芯片，用免疫組化方法觀察337例正常粘膜、337例原發(fā)癌、50例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中EphB2的表達(dá)，比較它們在原發(fā)灶、癌旁正常粘膜、轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)差異； 2.應(yīng)用PCR-SSCP法檢測了EphB2基因在13例陰性胃癌中的基因突變情況； 3.應(yīng)用LOH方法觀察EphB2基因在13例陰性胃癌中染色體等位基因缺失情況

4、； 結(jié)果： 1.構(gòu)建六張組織芯片，其中含有337例癌旁正常組織，337例胃癌原發(fā)灶，50例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織。免疫組化結(jié)果顯示EphB2的表達(dá)隨腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展逐漸下降。EphB2在正常粘膜、原發(fā)癌、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中的表達(dá)率分別為：100％(337/337)、47.5％(160/337)和18％(9/50)。正常粘膜組織中EphB2的表達(dá)率顯著高于腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)(P＜0.05)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中的表達(dá)又顯著低于原發(fā)癌中的表

5、達(dá)(P＜0.05)EphB2陽性表達(dá)與腫瘤的大小、侵潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度及臨床病理分期明顯相關(guān)(P＜0.01)。 2.生存分析表明，EphB2表達(dá)缺失與中位生存時間下降明顯相關(guān)。此外，多變量分析Cox比例風(fēng)險模型顯示：同腫瘤的發(fā)生位置、侵潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移一樣，EphB2的缺失表達(dá)也是胃痛的獨立預(yù)后因素。 3.PCR-SSCP結(jié)果表明EphB2基因在胃癌組織中沒有大片段的插入或缺失，SSCP結(jié)果顯示：原發(fā)灶、

6、轉(zhuǎn)移灶及癌旁組織均未出現(xiàn)EphB2基因泳動變位，提示在胃癌中突變不是引起EphB2基因功能喪失的主要原因。 4.LOH結(jié)果顯示EphB2位點附近存在雜合缺失，在13例胃癌原發(fā)灶中，D1S2864、D1S512、D1S3214、D1S2698和D1S458的缺失率分別為2例(15.4％)、1例(7.7％)、2例(15.4％)、1例(7.7％)和4例(30.8％)，總的缺失率為61.5％。在13例淋巴結(jié)及轉(zhuǎn)移灶中，D1S2864、D

7、1S512、D1S3214、D1S2698和D1S458的缺失率分別為6例(46.2％)、4例(30.8％)、4例(30.8％)、4例(30.8％)和4例(30.8％)，總的缺失率為84.6％。提示在胃癌中雜合性缺失可能是引起EphB2基因功能喪失的主要原因。 結(jié)論： 1.免疫組化結(jié)果顯示EphB2在胃癌原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶中低表達(dá)，提示EphB2基因在腫瘤進(jìn)展中可能發(fā)揮重要的轉(zhuǎn)移抑制作用。 2.生存分析顯示EphB2