HER-2、p53的表達對乳腺癌蒽環(huán)類新輔助化療療效的影響.pdf

1、目的：近年來認為乳腺癌是全身性疾病，治療已經(jīng)從局部治療轉(zhuǎn)變?yōu)橐允中g(shù)為基礎(chǔ)的綜合性治療，新輔助化療(NAC)已經(jīng)成為局部晚期乳腺癌的標準治療。NAC即術(shù)前化療，可以降低腫瘤的臨床分期，為乳腺癌患者爭取保乳手術(shù)的機會，并且可以通過療效的評價來測試腫瘤對于化療方案的敏感性，從而為術(shù)后的進一步治療提供指導(dǎo)。 乳腺癌是激素依賴性腫瘤，受雌激素和孕激素調(diào)控，多數(shù)乳腺癌組織均有其受體(ER，PR)表達，且相當(dāng)一部分乳腺癌組織中存在原癌基因HE

2、R—2表達。對于ER，PR，HER—2及p53的表達與NAC療效之間的相關(guān)性一直存在爭論。 雖然紫杉類藥物已經(jīng)成為治療乳腺癌的基礎(chǔ)性藥物，以及赫賽汀等靶向治療藥物應(yīng)用于臨床，但在我國，蒽環(huán)類藥物作為治療乳腺癌的一線藥物的地位不容動搖。本研究通過回顧性分析對乳腺癌雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、人類表皮生長因子受體—2(HER2)及p53蛋白的表達與蒽環(huán)類藥物NAC療效之間的相關(guān)性進行探討，為臨床治療提供指導(dǎo)。 方

3、法：1.選擇中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院2006年1月～2008年6月的初治乳腺癌患者40例，均為女性，年齡25～70歲，中位年齡50.4歲，≤50歲者25例，>50歲者15例；絕經(jīng)前27例，絕經(jīng)后13例；Ⅱ期7例，Ⅲ期33例；浸潤性導(dǎo)管癌39例，浸潤性小葉癌1例。經(jīng)系統(tǒng)檢查均未發(fā)現(xiàn)有遠處轉(zhuǎn)移。化療前均經(jīng)粗針穿刺活檢確診為乳腺癌。術(shù)前臨床分期依據(jù)國際抗癌聯(lián)盟(UICC)標準。2.采用CEF方案者37例，CE方案者3例。CEF方案：表阿霉素(

4、EPI)70 mg/m2、5—氟尿嘧啶(5—FU)600 mg/m2、環(huán)磷酰胺(CTX600 mg/m2)靜滴，第1天；CE方案：EPI70 mg/m2、CTX600 mg/m2。21d為一個周期。預(yù)定NAC3～4周期。實際完成2個周期者30例，3個周期者4例，≥4個周期者6例。3.療效評定方法：NAC前后采用乳腺彩超、乳腺X線攝片分別測量腫瘤最大徑及垂直徑，33例患者NAC前后以彩超測量值進行對比，7例患者NAC前后以乳腺X線攝片測量

5、值進行對比。療效按WHO制定的統(tǒng)一標準分為：完全緩解(CR)：可見的病變完全消失，包括腋窩淋巴結(jié)；部分緩解(PR)：腫塊縮小50％以上；穩(wěn)定(SD)：腫塊縮小不及50％或增大未超過25％；進展(PD)：一個或多個病變增大25％以上或出現(xiàn)新病變。其中CR又分為病理完全緩解(pCR)和臨床完全緩解(cCR)。手術(shù)后再根據(jù)病理結(jié)果評價療效。以CR+PR為有效，SD+PD為無效。4.免疫組化SP法檢測：穿刺標本經(jīng)甲醛固定，石蠟包埋，4μm厚切片

6、，按常規(guī)免疫組化SP法作ER、PR、c—erbB2及p53檢測。ER、PR及p53陽性反應(yīng)物為棕黃色顆粒，定位于病變細胞的細胞核，將染色后陽性細胞>10％的定為受體陽性，≤10％的定為受體陰性；而c—erbB2定位于細胞膜，判定標準如下：沒有染色或少于30％腫瘤細胞染色為陰性(一)，>30％的腫瘤細胞有不完整細胞膜著色為弱陽性(+)，>30％的腫瘤細胞有較弱但完整的細胞膜著色為陽性(++)，>30％的腫瘤細胞較強完整細胞膜著色為強陽性(

7、+++)。本研究把免疫組化法結(jié)果為(一)和(+)者看作HER—2基因無擴增，(++)及(+++)者進一步行FISH檢測。鼠抗人ER、PR、p53、c—erbB2單抗及免疫組化S-P試劑盒均購自福建邁新生物技術(shù)有限公司。5.FISH檢測HER—2基因的擴增水平：切片常規(guī)二甲苯脫蠟、梯度乙醇水化，酸性亞硫酸鈉處理，蛋白酶消化，HCl浸泡，梯度乙醇脫水，丙酮固定，56℃烤片，加10μl探針工作液于組織切片上，73℃變性5 min后于原位雜交儀

8、中雜交，42℃濕盒雜交過夜(16 h)，50％甲酰胺、檸檬酸緩沖液、0.1％ NP—40和70％乙醇漂洗，暗處自然干燥玻片，DAPI復(fù)染，封片。暗處放置20 min后在熒光顯微鏡下觀察。結(jié)果判定標準：計數(shù)30個細胞，統(tǒng)計Ratio值(Ratio值=30個細胞核中紅信號總數(shù)/30個細胞核中綠信號總數(shù))。Ratio<1.8為陰性結(jié)果，提示該樣本無HER—2基因擴增；Ratio>2.2為陽性結(jié)果，提示樣本中HER—2基因發(fā)生擴增；Ratio在

9、1.8～2.2時，選擇增加計數(shù)細胞至100個，或重做FISH試驗來判斷最終結(jié)果。HER—2 FISHTM檢測試劑盒(美國VYSIS公司)購自北京金菩嘉生物技術(shù)有限公司。 結(jié)果：在NAC結(jié)束后根據(jù)按WHO制定的統(tǒng)一標準評估所有患者的臨床反應(yīng)性。40例患者中，達到CR者4例(10％)，其中pCR者1例；PR者26例(65％)；SD者9例(22.5％)；PD者1例(2.5％)。HER—2基因無擴增及p53表達陰性均與高反應(yīng)性相關(guān)(P均