IL-18在大鼠抗腎小球基底膜腎炎細(xì)胞凋亡中的研究.pdf

1、目的: 成功復(fù)制大鼠抗腎小球基底膜(GBM)腎炎模型，探討白細(xì)胞介素18(Interleukin-18，IL-18)在大鼠抗腎小球基底膜腎炎細(xì)胞凋亡中的作用，為進(jìn)一步闡明人類新月體性腎炎的致病機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法: 復(fù)制大鼠抗GBM腎炎模型。實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為兩組：腎炎模型組大鼠一次性尾靜脈注射兔抗大鼠GBM血清；正常對(duì)照組大鼠尾靜脈注射等量正常兔血清。腎炎模型組于實(shí)驗(yàn)前一周足墊皮內(nèi)注射正常兔血清進(jìn)行預(yù)免疫。分別于實(shí)驗(yàn)第2d

2、、7d、14d、21d和28d，行以下處理：收集24h尿、血清樣本檢測大鼠24h尿蛋白、血肌酐及血尿素氮含量；取腎組織經(jīng)光鏡觀察腎組織病理變化；采用TUNEL法檢測大鼠腎組織細(xì)胞凋亡情況；采用免疫組織化學(xué)、RT-PCR和Western blot法分別檢測腎組織中IL-18、Fas、FasL mRNA和蛋白表達(dá)情況；運(yùn)用RT-PCR和分光光度法檢測腎組織中caspase-3 mRNA表達(dá)情況和蛋白活性。
　　 結(jié)果:
　　

3、 1．與正常對(duì)照組相比，腎炎模型組大鼠尾靜脈注射兔抗大鼠GBM血清后，24h尿蛋白含量第2d開始升高，第14d達(dá)到高峰，第21d有所下降，但仍較正常對(duì)照組高(均P<0.01)；血肌酐和血尿素氮含量于第2d開始升高，并隨著病程的延長持續(xù)上升(均P<0.01)。
　　 2．光鏡觀察到腎小球內(nèi)細(xì)胞數(shù)于免疫后第2d輕微增多，至第7d繼續(xù)增多，并于第14d明顯增多，可見細(xì)胞性新月體形成，腎小管內(nèi)大量蛋白管型，腎小管上皮細(xì)胞腫脹，間質(zhì)可見大

4、量炎性細(xì)胞浸潤，第21d和第28d腎小球內(nèi)細(xì)胞數(shù)有所下降，部分腎小球纖維化。
　　 3．TUNEL法觀察到腎炎模型組大鼠腎小球內(nèi)凋亡細(xì)胞于第2d開始升高，第14d達(dá)高峰，此后有所減少，但仍維持較高水平，與正常對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　 4．腎炎模型組大鼠腎組織IL-18 mRNA和蛋白表達(dá)于第2d開始升高，第14d達(dá)峰值，第21d有下降趨勢，但仍高于正常對(duì)照組(均P<0.01)。
　　

5、5．腎炎模型組大鼠腎組織中Fas、FasL mRNA和蛋白表達(dá)均于第2d開始升高，第14d達(dá)峰值，第21d有下降趨勢，但仍高于正常對(duì)照組(均P<0.01)。
　　 6．腎炎模型組大鼠腎組織中caspase-3 mRNA表達(dá)和其蛋白活性均于第2d開始升高，第21d達(dá)峰值，第28d有下降趨勢，但仍高于正常對(duì)照組(均P<0.01)。7．相關(guān)分析顯示腎炎模型組大鼠腎組織IL-18與24h尿蛋白、血肌酐、血尿素氮、Fas、FasL、cas