細辛揮發(fā)油抗植物病原真菌活性及作用機理研究.pdf

1、本文通過細辛不同提取物對植物病原真菌活性抑制作用的測定，明確細辛主要抗菌活性部位為揮發(fā)油；通過與市售農(nóng)藥甲霜靈和農(nóng)抗120的對比實驗，了解了細辛揮發(fā)油對5種植物病原真菌的作用強度，并對作用機理和活性成分進行了初步分析，為開發(fā)利用細辛作為植物源農(nóng)藥奠定了基礎。 采用生長速率法測定細辛揮發(fā)油對16種植物病原真菌的抑制作用，結果顯示：細辛揮發(fā)油濃度為500μg/ml時，抑制率在38.54-100％之間，對其中14種病原菌的抑制率在50

2、％以上。孢子萌發(fā)試驗結果顯示：細辛揮發(fā)油對土生鏈格孢菌(Alternariahumicola)、砂仁葉斑病菌(Petalozziasp.)孢子的萌發(fā)抑制率分別為72.5％和72.85％。對5種植物病原真菌的菌絲生長毒力作用測定結果表明：細辛揮發(fā)油對人參根疫病菌(Phytophthoracactorum)毒力作用最強，EC50為59.70μg/mL，與甲霜靈相近；對土生鏈格孢菌(A.humicola)、煙草赤星病菌(A.longipes)

3、、砂仁葉斑病菌(Petalozziasp.)、枸杞炭疽病菌(ColletotrichumgloeosporioidesPenz.)的EC50值分布在296.48～410.20μg/ml之間，作用強度低于甲霜靈；對土生鏈格孢菌、煙草赤星病菌的抑制作用與農(nóng)抗120相當，而對砂仁葉斑病菌、枸杞炭疽病菌抑制作用優(yōu)于農(nóng)抗120。因此可以得出結論：細辛揮發(fā)油具有較廣譜、較強的抗植物病原真菌活性。 以A.humicola為主要目標菌株，研究觀

4、察了細辛揮發(fā)油抑制植物病原真菌的作用機制。經(jīng)掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn)細辛揮發(fā)油能影響孢子形態(tài)結構，使孢子外表面出現(xiàn)凹陷，部分孢子出現(xiàn)囊狀的凸起物。采用電導率法測定細辛揮發(fā)油對病原菌細胞膜通透性的影響，結果顯示：在作用2.5、5.0、10.0h后菌絲細胞外滲液電導率值隨著作用時間延長增加，分別為5.318、6.362、8.982μS/cm，明顯高于空白對照組1.988、2.753、2.613μS/cm，與對照農(nóng)藥農(nóng)抗120作用相近，略高于甲霜靈組

5、，提示細辛揮發(fā)油使細胞膜完整性受到破壞，內容物外滲。采用3，5-二硝基水楊酸法測定A.humicola對營養(yǎng)物質的吸收利用情況發(fā)現(xiàn)：在正常培養(yǎng)基上培養(yǎng)96h后菌絲對還原糖的吸收利用率為9.95％，在含有細辛揮發(fā)油的培養(yǎng)基上為-0.63％，沒有吸收，可見細辛揮發(fā)油顯著影響病原真菌對還原糖的吸收利用率。采用比色法測定細辛揮發(fā)油對線粒體內琥珀酸脫氫酶(SDH)活性的影響，結果表明隨著細辛揮發(fā)油滲入病原菌細胞內，在作用96h后SDH酶比活力降低

6、1.2倍，病原菌絲體重量降低1.8倍，說明細辛揮發(fā)油對病原真菌氧化-還原系統(tǒng)造成了一定程度的破壞，影響菌體的生物合成，最終導致菌絲體的死亡。 通過生物—薄層法發(fā)現(xiàn)，并通過菌絲生長速率法驗證了甲基丁香酚是細辛揮發(fā)油中主要抗菌活性成分之一。采用GC-MS分析了細辛揮發(fā)油中的化學成分，共檢測到26種成分，其中甲基丁香酚在揮發(fā)油中的相對含量為19.45％；此外，4,4,6,6-四甲基-二環(huán)[3.1.0]己-2-烯、3,4-亞甲基二氧苯丙