Wnt信號(hào)通路抑制蛋白SOST-DKK1在氟性骨損傷骨周化骨中的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：建立大鼠成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)模型,進(jìn)行不同劑量及時(shí)段的染氟,觀察氟對(duì)成纖維細(xì)胞增殖活性的影響,并觀察不同濃度的氟在不同時(shí)間段對(duì)成纖維細(xì)胞Cbfal、ALP及Wnt/β-catenin信號(hào)通路抑制蛋白SOST和DKK1表達(dá)的影響,探討Cbfal、ALP、SOST及DKK1在氟性骨損傷發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制。
　　方法：將體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞分為對(duì)照組和7個(gè)染氟劑量組(0.0001、0.001、0.01、0.1、1、10、20mg/

2、L),采用MTT法觀察成纖維細(xì)胞增殖活性的變化,采用ELISA法測(cè)定細(xì)胞上清液Cbfal、SOST和DKK1的含量,用AMP法測(cè)定ALP的含量。
　　結(jié)果：MTT結(jié)果可見,與對(duì)照組相比,氟離子濃度為0.0001mg/L、0.001mg/L和0.01mg/L的組,其成纖維細(xì)胞增殖活性增加;氟離子濃度為0.1mg/L的劑量組,除96h組外,其他時(shí)間段與對(duì)照組比較均表現(xiàn)為增殖活性增加;氟離子濃度為1mg/L的劑量組,成纖維細(xì)胞增殖活性在

3、12、24、48h時(shí)間段與對(duì)照組相比增殖活性增加,96h與對(duì)照組相比比增殖活性降低;氟離子濃度為10mg/L的劑量組,2、4、96h時(shí)間組與對(duì)照組相比增殖活性降低,24、48h時(shí)間組與對(duì)照組相比增殖活性增加(P<0.05)。氟離子濃度為20mg/L的劑量組,在各個(gè)時(shí)間段內(nèi)均表現(xiàn)為增殖活性降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與對(duì)照組相比,成纖維細(xì)胞Cbfal的表達(dá)量在氟離子濃度為0.01mg/L的48h組、0.01、0.1、10、20

4、mg/L的72h組及96h的所有組均顯著性升高;染氟成纖維細(xì)胞Cbfal的表達(dá)量在染氟48h的0.0001、0.001、0.1mg/L組、染氟72h的0.0001、1、20mg/L及染氟96h的0.0001、0.001、1、20mg/L組均較染氟24h組相比明顯升高(P<0.05)。氟對(duì)成纖維細(xì)胞ALP表達(dá)的影響作用與對(duì)照組相比不明顯,僅在72h的20mg/L組和96h的0.1mg/L組較對(duì)照組相比升高(P<0.05)。染氟成纖維細(xì)胞S

5、OST的表達(dá)量在染氟48h的0.0001、0.001、0.01mg/L組,染氟72h的1、10mg/L組及染氟96h的0.001、0.01、0.1、1mg/L組均較染氟0mg/L組相比明顯降低;染氟成纖維細(xì)胞SOST的表達(dá)量在染氟48h的0.01mg/L組,染氟96h的0.001、0.01、0.1、1、10mg/L組均較染氟24h組相比明顯降低(P<0.05)。染氟成纖維細(xì)胞DKK1的表達(dá)量在染氟48h的0.001mg/L組、染氟72h

6、的0.01、0.1、1、10、20mg/L組及染氟96h的0.01、0.1、1、10、20mg/L組均較染氟0mg/L組相比明顯降低;染氟成纖維細(xì)胞DKK1的表達(dá)量在染氟48h的0.0001、0.001、0.01mg/L組,染氟72h的0.001、0.01、1、10、20mg/L及染氟96h的0.01、0.1、1、20mg/L組均較24h組相比明顯降低(P<0.05)。
　　結(jié)論：氟對(duì)成纖維細(xì)胞增殖活性的影響呈一定的劑量-效應(yīng)關(guān)系