藥用植物絞股藍(lán)種質(zhì)資源研究.pdf

1、絞股藍(lán)Gynostemmapentaphyllum(Thunb)Makino，葫蘆科多年生攀緣草質(zhì)藤本植物，全草入藥。我國民間用絞股藍(lán)強(qiáng)身益壽的歷史源遠(yuǎn)流長，早在明代《救荒本草》、《農(nóng)政全書》、《本草綱目》中就有記載。1986年國家科委將絞股藍(lán)為“名貴中草藥”列入“星火計(jì)劃”?，F(xiàn)代藥理研究表明，絞股藍(lán)能有效的改善血脂代謝、降低血脂血糖水平并具有抗疲勞和延長細(xì)胞壽命、抗氧化、抗衰老、抗腫瘤、抗癌、鎮(zhèn)靜、催眠、止痛等廣泛的藥理作用，加之絞股

2、藍(lán)又多產(chǎn)于陜西南部及長江以南地區(qū)，因此，它又被冠以“南方人參”之稱。 絞股藍(lán)在我國的分布比較廣泛，但其儲(chǔ)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠資源開發(fā)的需要，且由于過量采集，野生資源已不斷減少，因此國家林業(yè)局保護(hù)司已經(jīng)把絞股藍(lán)列為國家二級保護(hù)植物。開展絞股藍(lán)種質(zhì)資源研究是進(jìn)行有效資源保護(hù)以及絞股藍(lán)品種選育、遺傳理論研究、生物技術(shù)研究和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。制定統(tǒng)一的絞股藍(lán)種質(zhì)資源規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)，有利于整合全國絞股藍(lán)種質(zhì)資源，規(guī)范絞股藍(lán)種質(zhì)資源的收集、整理和保存

3、等基礎(chǔ)性工作，創(chuàng)造良好的資源和信息共享環(huán)境及條件；有利于有效地保護(hù)和高效地利用絞股藍(lán)種質(zhì)資源，充分挖掘其潛在的藥用、經(jīng)濟(jì)、社會(huì)和生態(tài)價(jià)值，促進(jìn)全國絞股藍(lán)種質(zhì)資源研究工作的有序、高效發(fā)展。 本研究在對我國幾大主產(chǎn)區(qū)絞股藍(lán)種質(zhì)資源調(diào)查收集的基礎(chǔ)上，就其形態(tài)學(xué)特征和品質(zhì)特性進(jìn)行相關(guān)研究后對絞股藍(lán)形態(tài)學(xué)分化多樣性進(jìn)行了探討，對不同種質(zhì)資源進(jìn)行了評價(jià)，并在分子水平上建立了絞股藍(lán)種質(zhì)資源的DNA指紋圖譜，最終制定了絞股藍(lán)種質(zhì)資源的數(shù)據(jù)描述規(guī)

4、范標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1)對國內(nèi)絞股藍(lán)主產(chǎn)區(qū)的野生絞股藍(lán)資源及人工栽培絞股藍(lán)資源進(jìn)行全面細(xì)致調(diào)查及收集。包括對其地理因子、生態(tài)環(huán)境、種質(zhì)特性等進(jìn)行深入考察。在考察的基礎(chǔ)上，總結(jié)了絞股藍(lán)資源利用現(xiàn)狀，指出了絞股藍(lán)資源利用的現(xiàn)存問題并提出了相應(yīng)解決對策。 2)從根、莖、葉、花、果實(shí)及種子等形態(tài)學(xué)特征詳細(xì)研究絞股藍(lán)各種質(zhì)資源的差異，并進(jìn)行相關(guān)方差分析和聚類分析，進(jìn)而綜合統(tǒng)計(jì)及評價(jià)不同種質(zhì)之間的差異，探討其形態(tài)分化多樣性和遺傳

5、多樣性。方差分析結(jié)果顯示，在12個(gè)性狀特征值中，有5個(gè)性狀特征達(dá)到了差異顯著水平(P＜0.05)，占41.6％，其中，小葉長寬比、表皮毛數(shù)目、種子大小均達(dá)到了差異極顯著(P＜0.01)水平，因此，可將這些顯著差異性狀作為探討絞股藍(lán)種質(zhì)資源形態(tài)分化的重要生物學(xué)性狀。 3)研究各種質(zhì)資源的品質(zhì)性狀并進(jìn)行系統(tǒng)比較，全面進(jìn)行資源評價(jià)。綜合分析各種質(zhì)資源品質(zhì)和質(zhì)量以及結(jié)合其各項(xiàng)生長指標(biāo)，提出了可作為后續(xù)絞股藍(lán)良種選育研究的一些優(yōu)良絞股藍(lán)種

6、質(zhì)資源。 4)以RAPD分子標(biāo)記技術(shù)構(gòu)建絞股藍(lán)DNA指紋圖譜。本研究以不同類型絞股藍(lán)DNA為模板，進(jìn)行RAPD反應(yīng)條件的優(yōu)化及RAPD結(jié)果分析。最終篩選的RAPD反應(yīng)條件為：20μlPCR反應(yīng)體系中包括了10×buffer2.0μl，Mg2+2.0mM，dNTP0.2mmolL-1，引物0.5mmolL-1，Taq酶1U，模板DNA50ng。反應(yīng)程序?yàn)?4℃3min→(94℃30s→38℃40s→72℃1min)45個(gè)循環(huán)→72

7、℃10min→4℃保持。進(jìn)而從66個(gè)隨機(jī)引物中篩選出了5個(gè)多態(tài)性好的引物作為絞股藍(lán)的RAPD分子標(biāo)記隨機(jī)引物，并進(jìn)一步對各種質(zhì)資源RAPD擴(kuò)增結(jié)果的多態(tài)性和特征性條帶進(jìn)行識(shí)別，建立了絞股藍(lán)分子標(biāo)記識(shí)別表和絞股藍(lán)分子標(biāo)記檢索表，并計(jì)算了其基因型相似系數(shù)，利用歐氏距離進(jìn)行系統(tǒng)聚類分析，從而全面構(gòu)建絞股藍(lán)DNA指紋圖譜。 5)綜合絞股藍(lán)各種質(zhì)資源的地理分布特征、形態(tài)學(xué)特征、品質(zhì)特性、分子標(biāo)記特征等各方面的數(shù)據(jù)，參照相關(guān)種質(zhì)資源制定的原