松茸多糖的分離純化與抗腫瘤活性的研究.pdf

1、松茸是一種寶貴的食藥用真菌,味道鮮美,營(yíng)養(yǎng)豐富,所含多糖具有良好的抗腫瘤、增強(qiáng)免疫等活性。但目前對(duì)松茸的研究多集中于對(duì)松茸生長(zhǎng)和菌絲體糖蛋白類物質(zhì)的研究。本文以松茸子實(shí)體作為研究對(duì)象,對(duì)松茸多糖的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化,分離純化得到純多糖,對(duì)其進(jìn)行了酶解；并分別對(duì)粗多糖、純多糖和修飾后多糖的抗腫瘤活性進(jìn)行了初步研究。具體內(nèi)容如下：確定了松茸多糖的較優(yōu)提取工藝為料液比1：30,在90℃下,浸提3h,提取次數(shù)以2次(提取比例為94.3%)為宜；乙

2、醇沉淀的優(yōu)化條件為3倍體積95%乙醇沉淀6h。采用Sevag法脫蛋白,通過(guò)脫色率和多糖損失率兩個(gè)指標(biāo),比較活性炭、過(guò)氧化氫、大孔樹(shù)脂三種脫色方法,確定大孔樹(shù)脂法是其中最佳的脫色方法(脫色率為54.72%,多糖損失率為37.84%)。經(jīng)過(guò)截留分子量為8000~1000的透析袋透析后,進(jìn)行DEAE-52纖維素層析,得到洗脫液濃度分別為0、0.2mol/L、0.5mol/L NaCl溶液時(shí)的三個(gè)組分：松茸水提多糖( TMWEP-1、TMWEP

3、-2、TMWEP-3)。對(duì)含量較高的組分TMWEP-2進(jìn)行Sephadex G-100凝膠層析,用水洗脫,得到兩個(gè)亞級(jí)組分：TMWEP-2Ⅰ和TMWEP-2Ⅱ。通過(guò)Sephadex G-100凝膠層析和高校液相色譜分析,對(duì)TMWEP-2Ⅰ進(jìn)行純度鑒定,證明該組分是分子量分布均勻的純多糖。對(duì)得到的純多糖TMWEP-2Ⅰ進(jìn)行薄層層析、紫外光譜分析和紅外光譜分析。確定了用蝸牛酶降解松茸多糖的優(yōu)化條件為：酶解時(shí)間5h,酶與底物比1：5,溫度40

4、℃,pH值6.0。分別對(duì)松茸多糖的粗多糖、純多糖組分TMWEP-2Ⅰ以及蝸牛酶降解多糖進(jìn)行了體外抗腫瘤活性的研究。選用SGC-7901、Hela、HT-29三種腫瘤細(xì)胞,分10μg/mL、100μg/mL、1000μg/mL三個(gè)濃度梯度,用CCK-8法測(cè)定多糖對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率。結(jié)果表明：松茸多糖對(duì)三種腫瘤細(xì)胞具有抑制作用,抑制率隨著純度和濃度的提高而提高,降解后的多糖沒(méi)有直接抗腫瘤活性。本文對(duì)松茸多糖的分離純化及抗腫瘤活性的研究擴(kuò)展了