EB病毒潛伏膜蛋白2A（LMP2A）重組腺病毒轉(zhuǎn)染樹突狀細(xì)胞治療小鼠移植瘤模型的研究.pdf

1、目的構(gòu)建表達(dá)EB病毒LMP2A的小鼠移植腫瘤模型,用EB病毒LMP2A重組腺病毒轉(zhuǎn)染小鼠樹突狀細(xì)胞治療該小鼠腫瘤模型并評(píng)價(jià)其療效,為研究以DC為基礎(chǔ)的EBV相關(guān)腫瘤的免疫治療提供有益資料.方法將EB病毒LMP2A基因克隆至逆轉(zhuǎn)錄質(zhì)粒pLXSN中,重組質(zhì)粒用脂質(zhì)體Clonfectin轉(zhuǎn)入BALB/c小鼠來源的骨髓瘤細(xì)胞SP2/0,經(jīng)G418篩選獲得陽性克隆并經(jīng)PCR、RT-PCR、間接免疫熒光、流式細(xì)胞儀鑒定.腹股溝皮下接種該細(xì)胞入BAL

2、B/c小鼠得到移植瘤模型,兩周后切除腫瘤組織并作蘇木素-伊紅(H&E)染色切片.Inaba法分離并體外誘導(dǎo)BALB/c小鼠骨髓樹突狀細(xì)胞,第七天用重組腺病毒轉(zhuǎn)染樹突狀細(xì)胞并以脂多糖(LPS)誘導(dǎo)成熟.流式細(xì)胞術(shù)鑒定樹突狀細(xì)胞表面分子的表達(dá),MLR法檢測樹突狀細(xì)胞刺激同種異體淋巴細(xì)胞增殖能力.樹突狀細(xì)胞皮下回輸小鼠荷瘤模型,觀察腫瘤生長情況、生存期.LDH釋放法檢測小鼠體內(nèi)CTL的殺傷活性.標(biāo)準(zhǔn)ELISA法檢測特異性CTL的IFN-γ分泌

3、情況.結(jié)論:將EB病毒LMP2A基因整合入BALB/c小鼠來源的腫瘤細(xì)胞SP2/0細(xì)胞并表達(dá).成功地構(gòu)建表達(dá)EB病毒潛伏膜蛋白2A(LMP2A)的小鼠移植瘤模型.為樹突狀細(xì)胞治療EB病毒相關(guān)腫瘤的動(dòng)物試驗(yàn)奠定基礎(chǔ).利用含有EB病毒LMP2A的重組腺病毒將LMP2A轉(zhuǎn)入小鼠樹突狀細(xì)胞,該樹突狀細(xì)胞可以在體內(nèi)誘導(dǎo)出針對(duì)EB病毒LMP2A的特異性CTL,誘導(dǎo)出的CTL對(duì)表達(dá)LMP2A的腫瘤細(xì)胞有較強(qiáng)的殺傷能力,并可分泌Th1型細(xì)胞因子IFN-