細(xì)胞骨架和GFAP基因在NDGA誘導(dǎo)人惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞分化過程中的作用.pdf

1、主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:1.應(yīng)用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)、激光共聚焦顯微鏡、原位包埋、選擇性抽提和高壓透射電鏡技術(shù),首次對(duì)兩種不同分化程度的膠質(zhì)瘤細(xì)胞系CHG-5和SHG-44細(xì)胞骨架系統(tǒng)(胞質(zhì)骨架和核骨架)的定位及分布特征進(jìn)行了比較研究.2.應(yīng)用基因工程技術(shù)分別構(gòu)建了反義GFAP逆轉(zhuǎn)錄病毒載體和攜帶綠色熒光蛋白(GFP)的正義GFAPcDNA真核表達(dá)載體,并分別將其成功導(dǎo)入兩種膠質(zhì)瘤細(xì)胞.RT-PCR、ISH和ICC結(jié)果顯示,反義GFAPcD

2、NA封閉CHG-5細(xì)胞內(nèi)源性GFAP表達(dá)后,GFAPmRNA及其蛋白表達(dá)減弱甚至缺失,瘤細(xì)胞異型性增加,突起縮短,細(xì)胞增殖速度加快.與之相反,正義GFAPcDNA轉(zhuǎn)染SHG-44細(xì)胞后,GFAPmRNA及其蛋白表達(dá)增強(qiáng),瘤細(xì)胞形態(tài)趨向成熟,突起增多變細(xì),細(xì)胞增殖速度顯著降低,群體倍增時(shí)間延長(zhǎng),細(xì)胞骨架蛋白表達(dá)增加.它們對(duì)細(xì)胞周期也有截然不同的干預(yù)作用.提示GFAP基因功能狀態(tài)可能是決定膠質(zhì)瘤細(xì)胞分化程度及惡性行為的重要環(huán)節(jié).3.該研究首

3、次探討了NDGA對(duì)反義GFAPcDNA存在下的GFAP基因表達(dá)的誘導(dǎo)作用.結(jié)果顯示,反義GFAPcDNA封閉的CHG-5細(xì)胞經(jīng)NDGA(100μ M)作用后,GFAPmRNA及其蛋白重新高表達(dá),且在時(shí)間和強(qiáng)度上與NDGA誘導(dǎo)細(xì)胞分化、抑制細(xì)胞增殖及增加細(xì)胞骨架蛋白含量等作用呈正相關(guān).4.利用活細(xì)胞分子探針—GFP基因標(biāo)記了中國(guó)人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系SHG-44＃獲表達(dá)及傳代,為體外和在體進(jìn)一步動(dòng)態(tài)研究膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、分化及侵襲過程提供了新方法和