體內(nèi)構(gòu)建組織工程化軟骨的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)以骨髓間質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymalstemcells，MSCs)為種子細(xì)胞，將MSCs與軟骨細(xì)胞混和培養(yǎng)，復(fù)合聚乙醇酸(polyglycolicacid，PGA)支架材料上塑形，形成軟骨組織。同時(shí)又以殼聚糖膠原共混膜為三維支架材料，軟骨細(xì)胞為種子細(xì)胞，體內(nèi)構(gòu)建組織工程化軟骨。通過本實(shí)驗(yàn)的進(jìn)一步研究，為構(gòu)建組織工程氣管軟骨及氣管粘膜上皮的復(fù)合提供理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，最終構(gòu)建組織工程氣管?！　⊙芯糠椒ǎ孩俜蛛x、培養(yǎng)、擴(kuò)傳兔MSCs

2、與軟骨細(xì)胞按一定比例混和(3∶1)，以6.0×1010/L的細(xì)胞終濃度接種于PGA支架作為共培養(yǎng)組，以相同終濃度的單純MSCs和單純軟骨細(xì)胞分別接種作為陰性與陽性對(duì)照。將細(xì)胞-材料復(fù)合物種植在成兔皮下，各標(biāo)本于體內(nèi)培養(yǎng)8wk時(shí)取材，通過大體觀察、組織學(xué)等方法對(duì)新生軟骨進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。②分離、培養(yǎng)、擴(kuò)傳兔軟骨細(xì)胞，接種在殼聚糖—膠原共混膜上，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞在共混膜中的生長情況。體外培養(yǎng)7d后，將細(xì)胞—材料復(fù)合物種植在成兔皮下，6w取材

3、，對(duì)獲得的同種異體工程化軟骨進(jìn)行組織學(xué)評(píng)價(jià)。 研究結(jié)果：①各組細(xì)胞與PGA支架的黏附良好?；旌团囵B(yǎng)組及陽性對(duì)照組(軟骨細(xì)胞組)體內(nèi)培養(yǎng)8wk后均形成了成熟的軟骨組織，并基本保持了復(fù)合物初始的大小和形狀，兩組新生軟骨外觀及組織學(xué)特征基本相同。陰性對(duì)照組(單純MSCs組)在體內(nèi)培養(yǎng)過程中未形成軟骨組織，而是形成了纖維結(jié)締組織。②兔軟骨細(xì)胞接種于殼聚糖—膠原共混膜上4h后有貼壁現(xiàn)象出現(xiàn)，細(xì)胞呈梭形。培養(yǎng)48h后，軟骨細(xì)胞分裂增殖越來越