心肌營養(yǎng)素-1在高靜水壓促心肌成纖維細(xì)胞增殖中的作用及信號(hào)通路.pdf

1、目的：探討心肌營養(yǎng)素-1(cardiotrophin-1，CT-1)在高靜水壓下促心肌成纖維細(xì)胞增殖的作用，觀察三條位于 gp130 下游的信號(hào)通路，即 JAK-信號(hào)傳導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子3(singal transducer and activator of transcription3，JAK-STAT3)通路、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2(extracellular signal regulatedkinasesl/2，ERKl/2)通路

2、和磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatedylinos Itol 3 kinas，PI3-K)通路在心肌營養(yǎng)素-1(eardiotrophin 1,CT-1)致心肌成纖維細(xì)胞增殖中的作用。 方法：差速貼壁法原代培養(yǎng)心肌成纖維細(xì)胞，3-4代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，抗纖維連接蛋白抗體免疫細(xì)胞化學(xué)染色進(jìn)行細(xì)胞鑒定。利用自制周期性壓力培養(yǎng)裝置模擬體內(nèi)高血壓，對(duì)心肌成纖維細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，隨機(jī)分為8組： (1)空白對(duì)照

3、組(C)：大氣壓下培養(yǎng)。 (2)高靜水壓組(HOP)：160mmHg 壓力下培養(yǎng)。 (3)CT-1 正義寡核苷酸組(SODN)：160mmHg 壓力培養(yǎng)下，加入終濃度為 10μmol/L的 CT-1 正義寡核苷酸。 (4)CT-1 反義寡核苷酸組(ASODN)：160mmHg 壓力培養(yǎng)下，加入終濃度為10μmol/L的 CT-1 反義寡核苷酸。 (5)Jak-STAT3 阻斷劑(AG490)組：160mm

4、Hg壓力培養(yǎng)下，加入終濃度為 25μmol/L的 AG490。 (6)MEK-ERK1/2阻斷劑(PD98059)組：160mmHg壓力培養(yǎng)下，加入終濃度為20μmol/L的PD98059。 (7)P13-K 阻斷劑(LY294002)組：160mmHg壓力培養(yǎng)下，加入終濃度為10μmol/L 的 LY294002。 (8)助溶劑二甲亞砜(dimethyl sulphoxide，DMSO)組：160mmHg壓力培

5、養(yǎng)下，加入終濃度為100mg/mlx10-3的 DMSO。MTT法檢測細(xì)胞增殖，STAT3、ERK1/2和PI3-K表達(dá)和活性通過RT-PCR和WesternBlot分析測定。 結(jié)果： (1)與空白對(duì)照組相比高靜水壓組明顯促進(jìn)心肌成纖維增殖(0.153±0.011 vs 0.115±0.012，P＜0.05)，CT-1ASODN 能抑制高靜水壓所致的細(xì)胞增殖(0.132±0.013vs0.153±0.011，P＜0.05

6、)， (2)CT-1ASODN組STAT3、ERKl、ERK2和PI3-KmRNA表達(dá)水平明顯低于高靜水壓組(0.452±0.015vs0.855±0.012,P＜0.05)、(0.355±0.042 vs 0.553±0.061,P＜0.05)、(0.489±0.044vs 0.647±0.051，P＜0.05)、(0.486±0.060 vs 0.635±0.062，P＜0.05)；STAT3、ERK1和 P13-K蛋白表達(dá)

7、明顯低于高靜水壓組(2.09±0.25 vs2.47±0.28,P＜0.05)、(1.13±0.19 vs 1.61±0.22,P＜0.05)、(1.25±0.23 vs 1.71±0.25，P＜0.05)。 (3)AG490組明顯減弱高靜水壓的促增殖作用(0.118±0.018 vs 0.155±0.010，P＜0.05)并且增加ERK1蛋白表達(dá)(1.85±0.18 vs1.45±0.23，P＜0.05)。 (4)PD

8、98059組增強(qiáng)高靜水壓的促增殖(0.185±0.011vs 0.155±0.010，P＜0.05)并且增加STAT3蛋白表達(dá)(1.83±0.23 vs 1.58±0.22，P＜0.05)。 (5)LY294002干預(yù)后對(duì)高靜水壓的促增殖作用無影響(0.157±0.015 vs 0.155±0.010，P＞0.05)。 (6)SOND(0.151±0.010 vs 0.154±0.011 P＞0.05)和DMSO組(0.

9、110±0.015 vs 0.113±0.012，0.141±0.017 vs 0.155±0.010，P＞0.05)與對(duì)照組相比心肌成纖維細(xì)胞增殖無明顯差別。 結(jié)論： (1)在成纖維細(xì)胞增殖中，CT-1激活STA13、ERK1/2及PI3-K三條信號(hào)通路。 (2)CT-1在高靜水壓下促心肌成纖維細(xì)胞增殖作用主要通過STAT3通路；ERK1/2通路起負(fù)向調(diào)節(jié)作用；PI3-K沒有參與CT-1促心肌成纖維細(xì)胞增殖作用