小白菊內(nèi)酯對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖和凋亡的作用研究.pdf

1、胰腺癌是人體中一種重要的內(nèi)臟實(shí)體瘤,迄今為止無論在早期診斷上還是在治療上都是最難的惡性腫瘤之一.目前外科切除仍然是主要治療手段,但很多病人在明確診斷時(shí)已經(jīng)是中晚期而不能手術(shù),對(duì)于那些能手術(shù)切除的胰腺癌病人,由于腫瘤的早期復(fù)發(fā),預(yù)后仍然很差.近年來,己有不少學(xué)者將胰腺癌稱為"21世紀(jì)的癌中之王".長(zhǎng)期的臨床實(shí)踐表明,對(duì)于胰腺癌的治療,單純手術(shù)的治療效果是有限的,同時(shí)由于腫瘤耐藥性的產(chǎn)生,目前常用于胰腺癌的一些化療藥物的治療效果也不佳.因此

2、,為了提高胰腺癌患者的總的生存率,現(xiàn)在急切需要研究新的有效的治療方法,比如新的化療藥,介入治療和基因治療.而進(jìn)一步提高胰腺癌治療效果的關(guān)鍵則在于加強(qiáng)基礎(chǔ)研究,對(duì)其發(fā)病機(jī)理和分子生物學(xué)特性的進(jìn)一步闡明可以進(jìn)一步推動(dòng)新型的分子水平的靶向治療藥物的發(fā)展和新的治療方案的產(chǎn)生. 小白菊內(nèi)酯是從菊科植物中提取的一種倍半萜內(nèi)酯化合物,是野甘菊的主要活性成分.作為一種已經(jīng)有數(shù)百年歷史的傳統(tǒng)藥物,小白菊內(nèi)酯過去主要用于治療偏頭痛、風(fēng)濕病及炎癥.近

3、年來研究發(fā)現(xiàn),小白菊內(nèi)酯具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性,在體外可抑制多種腫瘤細(xì)胞株的生長(zhǎng)增殖,并誘導(dǎo)其凋亡,比如結(jié)腸癌、肝癌、膽管癌、急性/慢性白血病和多發(fā)性骨髓瘤.此外,小白菊內(nèi)酯還可以增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)其他多種抗腫瘤藥物的敏感性.進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn),小白菊內(nèi)酯誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的作用和其抑制核因子kappaB的活性,促進(jìn)活性氧簇的形成,以及致使線粒體失功能密切相關(guān).但是,這中間的具體作用機(jī)制仍然沒有完全闡明,這個(gè)問題引起了廣泛的興趣,同時(shí)也是本實(shí)驗(yàn)的

4、研究目的. 目的: 小白菊內(nèi)酯是一種倍半萜內(nèi)酯化合物,是菊科植物提取物中最重要的活性成分之一,過去主要用于治療偏頭痛、風(fēng)濕病及炎癥.當(dāng)前的研究顯示它也可能是一種有效的腫瘤抑制劑.因此,本實(shí)驗(yàn)的目的就是研究小白菊內(nèi)酯對(duì)人胰腺癌細(xì)胞的增殖抑制作用和凋亡誘導(dǎo)作用,并探討其機(jī)制. 方法: 不同濃度水平(0～30gM)的小白菊內(nèi)酯作用于人類胰腺癌細(xì)胞系BxPC一3共48小時(shí),選用不同實(shí)驗(yàn)方法觀察形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)特

5、性的改變.四唑鹽比色實(shí)驗(yàn)(MTT方法)觀察不同濃度小白菊內(nèi)酯對(duì)BxPC-3細(xì)胞增殖的影響;流式細(xì)胞術(shù)及DNA梯狀電泳(DNA ladder)檢測(cè)藥物誘導(dǎo)BxC-3細(xì)胞的凋亡;劃痕實(shí)驗(yàn)觀察小白菊內(nèi)酯對(duì)細(xì)胞遷移能力的影響;侵襲實(shí)驗(yàn)觀察小白菊內(nèi)酯對(duì)細(xì)胞侵襲能力的影響;蛋白免疫印跡法(Western Blotting)檢測(cè)不同藥物處理后一些凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平的變化,包括Bad,Bcl-2,Bax,easpase-9和pro-caspase-3

6、. 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用SPSSl3.0軟件完成,計(jì)量資料數(shù)據(jù)表示方式以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD),兩組計(jì)量資料采用非獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),各組指標(biāo)間的相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析. 結(jié)果: MTT結(jié)果顯示不同濃度小白菊內(nèi)酯處理后,胰腺癌細(xì)胞的增殖受到不同程度的抑制,且這種抑制作用呈劑量依賴性,即隨著濃度的增大,吸光度值明顯減少,增殖抑制率明顯增高,其半數(shù)有效濃度約為14.5gM.流式細(xì)胞術(shù)提示小白菊內(nèi)酯可以明

7、顯促進(jìn)胰腺癌BxPC-3細(xì)胞的凋亡,且具有劑量依賴性.DNA片斷凝膠電泳結(jié)果呈梯狀條帶,提示細(xì)胞發(fā)生凋亡,其細(xì)胞DNA發(fā)生斷裂.劃痕實(shí)驗(yàn)顯示小白菊內(nèi)酯明顯影響胰腺癌BxPC-3細(xì)胞的遷移能力.Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)顯示小白菊內(nèi)酯能明顯抑制胰腺癌BxPC-3細(xì)胞的侵襲能力,7.5gM處理組每高倍鏡視野下的細(xì)胞數(shù)為(94±7)個(gè),15μM處理組每高倍鏡視野下的細(xì)胞數(shù)為(58±8)個(gè),相對(duì)于對(duì)照組的每高倍鏡視野下(146±10)個(gè)細(xì)胞

8、,均有顯著意義(P<0.05).Western Blotting結(jié)果顯示小白菊內(nèi)酯對(duì)于Bad的表達(dá)沒有明顯影響,但可以明顯下調(diào)Bcl-2的表達(dá)量,降低Bax的表達(dá)水平,激活caspase-9,下調(diào)pro-caspase-3的表達(dá). 結(jié)論: 本實(shí)驗(yàn)以人胰腺癌BxPC-3細(xì)胞系為對(duì)象,研究小白菊內(nèi)酯對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制和凋亡誘導(dǎo)作用.研究結(jié)果表明小白菊內(nèi)酯可以明顯抑制胰腺癌細(xì)胞的增殖并促進(jìn)其凋亡,同時(shí)也影響腫瘤細(xì)胞的遷移和侵