加味二至煎治療便秘型腸易激綜合征作用機(jī)制實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過(guò)觀察便秘型腸易激綜合征模型大鼠經(jīng)加味二至煎煎劑治療后糞便粒數(shù)、糞便含水量、腸道敏感性及腸道傳輸功能的變化，并運(yùn)用免疫組化及放射免疫方法觀測(cè)腸組織中MC、5-HT、ICC及外周血中雌二醇、睪酮的變化，揭示其相關(guān)的作用機(jī)制，為臨床研究提供理論依據(jù)。
　　 方法：造模期：適應(yīng)性飼養(yǎng)5天，示一切正常后，將72只Wistar大鼠（雌雄各半，體重120-210g）隨機(jī)分為正常組和模型組。正常組24只，雌雄各半；模型組48只，雌雄各

2、半。正常組大鼠正常飼食，飲水，不灌胃；模型組大鼠給予冰水（0-4℃過(guò)濾除菌后的自來(lái)水）2ml./只，每日1次灌胃，共28天。觀察大鼠灌胃后24h的糞便粒數(shù)和含水量。每隔4天測(cè)一次大鼠體重。
　　 在冰水灌胃的第28天，取兩組各16只大鼠（雌雄各半）進(jìn)行CRD刺激，將腹部撤離反射（Abdominal Withdrawal Reflex，AWR）量化，進(jìn)行評(píng)分，觀測(cè)兩組大鼠之間及每組大鼠內(nèi)部雌雄大鼠之間腸道敏感性的變化。評(píng)分完畢后，

3、取兩組各8只大鼠（雌雄各半）禁食不禁水24小時(shí)后，用阿拉伯明膠與墨汁的混懸液灌胃（1ml/只），20min后斷頭處死取血，每只取血4ml，測(cè)血清雌激素、血清睪酮；剖腹，取全胃腸，測(cè)碳末推進(jìn)比，測(cè)完后即刻取大鼠的小腸（距回盲部5cm）、回盲部、結(jié)腸（距肛門5cm）各0.5cm，立即用生理鹽水沖洗，10％的中型緩沖福爾馬林液固定后，常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察組織的形態(tài)及結(jié)構(gòu)的變化。
　　 治療期：造模成功后第二天，

4、即實(shí)驗(yàn)的第29天將模型組大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、加味二至煎組、西沙必利組?？瞻讓?duì)照組和加味二至煎組各16只，西沙必利組8只，每組均雌雄各半，開(kāi)始治療。按100g體重大鼠1ml分別給予加味二至煎煎劑、西沙必利混懸液和生理鹽水灌胃，每天一次，每組均連續(xù)灌胃14天。正常組正常飼食，飲水，不灌胃。觀察灌胃后24h各組大鼠糞便粒數(shù)和含水量的變化，每隔4天測(cè)一次大鼠體重，觀察各組大鼠體重的變化。
　　 治療第14天，末次給藥后取正常組，空白

5、對(duì)照組，加味二至煎組各16只大鼠，進(jìn)行AWR評(píng)分，觀測(cè)各組大鼠之間及每組大鼠內(nèi)部雌雄大鼠之間腸道敏感性的變化。評(píng)分完畢后，取三組各8只大鼠（雌雄各半）斷頭取血，每只4ml，測(cè)血清雌激素、血清睪酮，并留取腸標(biāo)本做以下指標(biāo)測(cè)定：肥大細(xì)胞（MC）、5-羥色氨（5-HT）、局部腸組織病理觀察。
　　 同時(shí)取正常組、空白對(duì)照組、加味二至煎組剩余的各8只大鼠和西沙必利組的8只大鼠（雌雄各半），禁食不禁水24小時(shí)后，用阿拉伯明膠與墨汁的混懸液

6、灌胃（1ml/只），20min后斷頭處死，剖腹，取全胃腸，測(cè)碳末推進(jìn)比，測(cè)完后即刻取大鼠的小腸（距回盲部5cm）、回盲部各0.5cm，免疫組化法測(cè)c-kit的光密度、積分光密度及陽(yáng)性面積。
　　 結(jié)果：（1）冰水灌胃28天后，模型組大鼠糞質(zhì)干結(jié)，糞便粒數(shù)減少，腸道傳導(dǎo)功能下降，腸道敏感性降低，與正常組對(duì)比均有顯著差異（P<0.05）。雌性大鼠腸道容量閾值比雄性大鼠低，兩者相比有顯著差異（P<0.05），即雌性大鼠腸道更易致敏。<

7、br>　　 （2）經(jīng)加味二至煎治療后，加味二至煎組大鼠糞便粒數(shù)增加，糞便含水量上升，腸道傳導(dǎo)功能及敏感性逐漸恢復(fù)，回盲部及結(jié)腸組織中MC數(shù)量及5-HT含量下降，小腸及結(jié)腸組織中ICC數(shù)量上升，到第2周末與正常組大鼠相比均無(wú)顯著差異（P>0.05）。
　　 （3）經(jīng)西沙必利治療2周后，西沙必利組大鼠糞便粒數(shù)增加，腸道傳導(dǎo)功能逐漸恢復(fù)，小腸及結(jié)腸組織中ICC的數(shù)量增多，與正常組相比無(wú)顯著差異（P>0.05），其糞便含水量雖有所上升

8、，但與正常組相比仍存在顯著差異（P<0.05）。
　　 （4）模型組雌性大鼠外周血中雌二醇含量增高，與同組雄性大鼠相比腸道敏感性增強(qiáng)（P<0.05），加味二至煎治療后，雌二醇含量降低，腸道敏感性恢復(fù)正常。
　　 （5）光鏡下觀察各組大鼠各段腸組織：結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞排列整齊，未見(jiàn)急慢性炎癥、糜爛及潰瘍等器質(zhì)性改變。
　　 結(jié)論：加味二至煎煎劑可能通過(guò)改變腸組織中MC、5-HT、ICC及外周血中E2的含量來(lái)改善C-IB