高溫脅迫和鰻弧菌感染對櫛孔扇貝基因表達(dá)影響的分析及相關(guān)基因的克隆與表達(dá).pdf

1、⑧研究生學(xué)位論文高溫脅迫和鰻弧茵感染對櫛孔扇貝基因表達(dá)影響的分析及相關(guān)基因的克隆與表達(dá)■rf自tb￡舅曼曼一一、_”掛皂一!堡墾羹爨71wjL剁噸堂堂皇螻㈣JⅢ塑墮圭皇生塹L煳日。二塑堅(jiān)—墨二__中圜海洋走拳高溫脅迫和鯁孤菌感染對櫛孔扇貝基因表達(dá)影響的分析及相關(guān)基因的克隆與表達(dá)赴幾乎所有細(xì)胞的胞質(zhì)中都有表達(dá)。獲得了櫛iL扇貝HSP70基因的DNA序列和cDNA序列。該基因DNA序列令長4368bp，與牡蠣Hsc70基因結(jié)構(gòu)相似，都由6個

2、外顯子和5個內(nèi)含了組成。但內(nèi)舍子的長度比牡蠣Hsc70基因內(nèi)含子長。每個內(nèi)含子的兩端都有RNA正確剪切所必需的識別位點(diǎn)GT／AT。編碼的氨基酸序列含有HSP70家族的特征序列。RTPCR分析表明HSP70在櫛孔扇貝鰓、消化腺、外套膜、閉殼肌、腎和性腺中都有表達(dá)。利用非變性丙稀酰胺凝膠電泳和WAVE系統(tǒng)分析，找到了HSP70基因3’UTR中的一些個體內(nèi)插入缺失和點(diǎn)突變位點(diǎn)。通過分析三個群體(長島野生群體、長島選育一代群體及長島選育二代群體

3、)和長島野生群體不同耐熱能力個體中HSP70基因3’UTR多態(tài)性，找到了可能與抗逆性狀有關(guān)的位點(diǎn)。利用兼并引物RTPCR擴(kuò)增櫛孔扇貝外套膜肌球蛋白基因，得到個143bpcDNA片斷，編碼47個氨基酸的肌球蛋白vI基因片斷。分別利用5’RACE和3’RACE克隆肌球蛋白的5’端和3’端序列，拼接后得到長度為2940bp，含有2835bp開放閱讀框，編碼945個氨基酸的肌球蛋白VI部分基因。編碼的氨基酸具有肌球蛋自家族的保守序列和肌球蛋白V