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1、本研究分別以成年綿羊皮膚成纖維細胞和胎兒皮膚成纖維細胞為核供體,綿羊卵胞為核受體構(gòu)建重構(gòu)胚,并比較了兩種重構(gòu)胚的融合率、卵裂率和桑椹胚率。在37℃、5%CO2、飽和濕度下,DMEM-F12+1O%FBS培養(yǎng)液適宜于綿羊皮膚成纖維體外生長。組織塊培養(yǎng)法對于原代細胞的培養(yǎng)要優(yōu)于酶消化法。傳代培養(yǎng)時,酶化法和反復貼壁法可分離純化綿羊皮膚成纖維細胞,以D-Hanks為緩沖液配制的胰白酶適合綿羊皮膚成纖維細胞的消化。成年綿羊皮膚成纖維細胞較胎兒皮
2、膚成纖維細胞生長緩慢,群體倍增時間分別為48h和24h;并發(fā)現(xiàn)至少在傳至第1O代時有80.0%的染色體還保持正常的倍數(shù)(2n=54)。 用離子霉素聯(lián)合6-DMAP能有效地激活綿羊卵母細胞,其囊胚率為30.4%,高于細胞松弛素B法的27.4%;電場強度為1500v/cm,脈沖時間為40μsec較適合重構(gòu)胚的融合。采用盲吸法去核,保證卵母細胞成熟率的條件下,體外成熟18~21h比較適宜。 成年皮膚成纖維細胞-卵母細胞重構(gòu)胚,
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