茯苓藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.pdf

1、茯苓為多孔菌科真菌Poria cocos (Schw.) Wolf的干燥菌核，是我國傳統(tǒng)常用中藥材。茯苓藥材的質(zhì)量評價(jià)方面，目前主要采用的方法是鑒別植物形態(tài)、性狀、顯微鑒別、理化鑒別(分別檢查甾醇和多糖)，缺乏有效成分的定性鑒別和含量測定方法。 本論文對茯苓的有效成分三萜類物質(zhì)進(jìn)行了研究，目的在于尋找其中特征性成分作為化學(xué)對照品，建立相應(yīng)的定性及定量方法，制定茯苓藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，主要研究結(jié)果如下： 1) 茯苓藥材化學(xué)對照

2、品的制備及結(jié)構(gòu)確認(rèn) 經(jīng)溶劑萃取、硅膠柱層析、制備型HPLC、重結(jié)晶等方法，對茯苓藥材的乙醇提取物進(jìn)行分離，得到2個(gè)化合物。采用理化性質(zhì)和波譜技術(shù)(UV、IR、EI/MS、1H-NMR、13C-NMR、DEPT)相結(jié)合的方法鑒定了其結(jié)構(gòu)，分別為茯苓酸(Pachymic acid) 和 豬苓酸C(Polyporenic acid C)。其中，應(yīng)用二維核磁共振技術(shù)(1H-1HCOSY、HMBC、HMQC)歸屬了茯苓酸中所有的碳、氫原子

3、信號。茯苓藥材中茯苓酸的含量較高且專屬性強(qiáng)，確定其為對照品，HPLC法標(biāo)定其純度為98.54％。 2) 茯苓藥材三萜類成分薄層色譜鑒別 通過對10個(gè)不同的市售茯苓藥材進(jìn)行薄層色譜條件的篩選，最終確定了使用硅膠G薄層板，氯仿-乙酸乙酯-甲酸（10:1:0.2）為展開劑，噴10％硫酸乙醇溶液加熱顯色進(jìn)行檢識。供試品色譜中，顯示出4個(gè)清晰的紫紅色斑點(diǎn)；在與對照品色譜相應(yīng)位置上，觀察到相同的紫紅色斑點(diǎn)。該方法簡便、快速、重現(xiàn)性好、

4、結(jié)果可靠。 3) 茯苓藥材中總?cè)频暮繙y定 以茯苓酸為對照品，用香草醛—冰乙酸溶液、高氯酸顯色, 采用分光光度法在540nm波長處測定了茯苓中總?cè)频暮?；并進(jìn)行了相應(yīng)的方法學(xué)考察。茯苓酸在59.2~177.6μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，其回歸方程為：Y＝0.003754X－0.041 ，r＝0.9992。通過測定不同產(chǎn)地的10個(gè)樣品，初步確定總?cè)圃谙鄳?yīng)藥材中的含量不得少于0.45％。 4) 茯苓藥材中有效成分茯

5、苓酸的HPLC含量測定 采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Phenomenex Luna C18柱，4.6mm×150mm，5μm），柱溫25℃，乙腈-0.1％乙酸水（75 : 25）為流動(dòng)相，流速1mL·min-1，210nm波長檢測；并進(jìn)行相應(yīng)的方法學(xué)考察。茯苓酸在1.52~7.60μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，其回歸方程為：Y=2.65969×10-6X-0.103923，r=0.99942。通過測定不同產(chǎn)地的10個(gè)樣品，初步確定

6、茯苓酸在相應(yīng)藥材中的含量不得少于0.035％。該方法準(zhǔn)確、簡便，可以應(yīng)用于茯苓的質(zhì)量控制。 5) 茯苓藥材HPLC指紋圖譜研究 采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Phenomenex Luna C18柱，4.6mm×150mm，5μm），柱溫25℃，流動(dòng)相為乙腈-0.05％磷酸水(64：36)，流速1mL·min-1；二極管陣列(PDA)檢測器；分析時(shí)間60min。對十個(gè)不同的市售茯苓藥材進(jìn)行HPLC圖譜的比較分析，確定了