食源性肥胖對大鼠免疫功能的影響.pdf

1、目的： 1 建立食源性肥胖（diet induced obesity．DIO）SD大鼠模型，觀察肥胖大鼠與非肥胖大鼠脾臟CD4+和CD8+T淋巴細胞含量的變化，探究肥胖對大鼠細胞免疫功能的影響。 2 觀察大鼠脾臟淋巴細胞表面是否存在長型的leptin受體（Ob-Rb）蛋白以及淋巴細胞內(nèi)是否存在磷酸化的STAT3蛋白。 3 觀察肥胖大鼠與非肥胖大鼠脾臟淋巴細胞Ob-Rb-STAT3信號轉(zhuǎn)導通路活性的差異，從而探究肥

2、胖狀態(tài)下機體免疫功能的變化是否由leptin通過Ob-Rb-STAT3信號轉(zhuǎn)導通路作用引起。 方法： 1 利用高能量高脂肪飲食喂養(yǎng)大鼠14周后，將其與用普通飼料喂養(yǎng)的大鼠的體重進行比較，根據(jù)體重分為DIO組以及肥胖抵抗（diet resistant，DR）組。 2 分別取對照組、DR組和DIO組大鼠的脾臟，將其制成脾細胞的單細胞懸液，再利用流式細胞術檢測大鼠脾臟CD4+和CD8+T淋巴細胞在脾細胞中所占的百分比。

3、 3 分別提取對照組、DR組和DIO組大鼠脾細胞的蛋白，利用Western blot檢測大鼠淋巴細胞表面的Ob-Rb蛋白以及淋巴細胞內(nèi)磷酸化的STAT3蛋白的表達強度。 結果： 1 體重變化的結果：普通飼料喂養(yǎng)的對照組大鼠與高能量高脂肪飼料喂養(yǎng)的大鼠的初始平均體重相當，無顯著性差異（P>0．05）。經(jīng)過14周不同飼料的喂養(yǎng)之后，高能飼料組大鼠的平均體重是對照組大鼠平均體重的122．1％，具有顯著性差異（P<0．0

4、01）。在高能飼料組中，10只體重最高的大鼠設為DIO組，體重最低的10只大鼠設為DR組，DIO組大鼠的平均體重是DR組大鼠的136．7％，具有顯著性差異（P<0．001）。 2 三組大鼠脾細胞中CD4+和CD8+T淋巴細胞含量比較的結果：通過流式細胞術的檢測發(fā)現(xiàn)與對照組和DR組相比較，DIO組大鼠脾細胞中CD4+T淋巴細胞所占百分比變化并不明顯，沒有統(tǒng)計學差異（P>0．05）。與對照組和DR組相比較，DIO組大鼠脾細胞中CD8

5、+T淋巴細胞所占百分比增加（P<0．001）。上述CD4+和CD8+T淋巴細胞含量的變化導致。DIO組大鼠脾臟CD4+/CD8+細胞比值低于DR組大鼠（P<0．01）以及對照組大鼠（P<0．001）。 3 三組大鼠脾臟淋巴細胞Ob-Rb蛋白以及磷酸化的STAT3蛋白表達強度的比較：通過Western blot檢測發(fā)現(xiàn)在各組大鼠脾臟淋巴細胞所提取的蛋白中，128-kDa以及82-kDa處可見明顯蛋白表達條帶，與預期分子量一致，表明

6、Ob-Rb蛋白以及705位酪氨酸磷酸化的STAT3蛋白在大鼠脾臟淋巴細胞中都有不同程度的表達。利用UVP凝膠成像系統(tǒng)分析后，DIO組、DR組以及對照組的大鼠脾臟淋巴細胞表面Ob-Rb蛋白以及細胞內(nèi)705位酪氨酸磷酸化的STAT3蛋白表達的密度值并沒有統(tǒng)計學的差異（P>0．05）。 結論： 1 經(jīng)過14周高能量高脂肪的飼料喂養(yǎng)，SD大鼠能發(fā)展成為。DIO大鼠和DR大鼠兩種體重存在明顯差異動物模型，這一結果的產(chǎn)生是由于DIO

7、大鼠和DR大鼠調(diào)控自身體重的方式不同所造成的。 2 流式細胞術的實驗結果表明，與對照組和DR組相比較，DIO組大鼠的脾細胞中CD4+T淋巴細胞所占百分比變化并不明顯，CD8+T淋巴細胞所占百分比增加，DIO組大鼠脾臟CD4+/CD8+細胞比值低于DR組以及對照組大鼠。這一實驗結果表明，肥胖使大鼠處于免疫抑制狀態(tài)，其細胞免疫功能降低，對感染的抵抗力下降，肥胖大鼠的易感性相應的增加。 3 Western blot的實驗結果表