鼻咽癌裸鼠模型血清蛋白質(zhì)組學(xué)的研究.pdf

1、中南大學(xué)碩士學(xué)位論文鼻咽癌裸鼠模型血清蛋白質(zhì)組學(xué)的研究姓名：吳麗莎申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：姚開泰20060501碩士學(xué)位論文中文摘要瘤細(xì)胞本身的生長(zhǎng)分化，也可以通過機(jī)體的循環(huán)系統(tǒng)改變整體的內(nèi)環(huán)境，最終導(dǎo)致腫瘤的無限增殖和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。從腫瘤細(xì)胞中釋放入血的這些蛋白質(zhì)，被認(rèn)為是一類腫瘤標(biāo)志物的候選分子因此，本實(shí)驗(yàn)的目的在于，利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，對(duì)NPC細(xì)胞培養(yǎng)上清液及NPC裸鼠模型血清進(jìn)行研究，尋找與NPC相關(guān)的血

2、清標(biāo)志物。研究方法本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)方法開展課題研究。1運(yùn)用細(xì)胞裂解的方法提取鼻咽癌細(xì)胞株58F和610B總蛋白質(zhì)，通過試驗(yàn)不同裂解液成份，調(diào)整2DE等點(diǎn)聚焦參數(shù)的設(shè)置，比較不同pI范圍IPG膠條實(shí)驗(yàn)結(jié)果，對(duì)鼻咽癌細(xì)胞株進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)研究。2利用無血清培養(yǎng)基對(duì)58F，610B細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，收集腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清液，以25％三氯醋酸(TCA)沉淀上清液總蛋白，隨后以含o007％8巰基乙醇丙酮洗滌沉淀的方法進(jìn)行蛋白質(zhì)的濃縮和純化。加

3、入適量裂解液結(jié)合超聲粉碎，得到適用于2DE的腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清蛋白質(zhì)樣品，進(jìn)行相應(yīng)蛋白質(zhì)組學(xué)研究。3收集58F；6IOB原位種植成功的NPC裸鼠模型血清及對(duì)照組同年齡，同性別未致瘤裸鼠血清樣本，采用不同分組類型的蛋白質(zhì)樣本進(jìn)行混合的策略，在不同的pI范圍的IPG膠條(pH310NE，pH47)下進(jìn)行2DE，利用ImageMaster50分析軟件以對(duì)照組血清2DE圖譜作為參考，對(duì)58F，610B血清2DE圖譜進(jìn)行差異分析，最終進(jìn)行差異蛋白質(zhì)

4、的質(zhì)譜鑒定。研究結(jié)果本研究利用以建成的鼻咽癌裸鼠模型血清作為實(shí)驗(yàn)樣本，結(jié)合鼻咽癌細(xì)胞株培養(yǎng)上清液蛋白質(zhì)組學(xué)研究結(jié)果，探索鼻咽癌相關(guān)的血清蛋白質(zhì)改變情況，為尋找NPC相關(guān)的血清標(biāo)志物提供可能的線索。本課題進(jìn)行了如下工作：1利用雙向凝膠電泳技術(shù)，通過對(duì)鼻咽癌細(xì)胞株58F和610B的實(shí)驗(yàn)，穩(wěn)定和優(yōu)化了蛋白質(zhì)提取方法及等電聚焦中的各種條件，建立了分辨率高重復(fù)性好的2DE圖譜。2對(duì)5—8F，61013鼻咽癌細(xì)胞培養(yǎng)上清液進(jìn)行蛋白質(zhì)組的研究，比較分