ω-3多不飽和脂肪酸誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞HepG2凋亡及其分子機(jī)制的研究.pdf

1、目的：本研究擬行體外實(shí)驗(yàn)觀察ω-3多不飽和脂肪酸的主要成分二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid，EPA)、二十二碳六烯酸(ducosahexenoic acid,DHA)對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2增殖、凋亡和SOD、MDA的影響，并初步探討其分子作用機(jī)制。以期為肝癌治療探索新的途徑。
　　 方法：以人肝癌細(xì)胞株HepG2為研究對(duì)象，進(jìn)行體外水平的研究。1.采用MTT法測(cè)定(1)不同濃度DHA、EPA 對(duì)人肝癌細(xì)胞

2、HepG2 細(xì)胞存活率的影響。(2)5-FU 單用及與不同濃度DHA、EPA 合用對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2的細(xì)胞毒性作用。2.免疫熒光染色檢測(cè)凋亡形態(tài)(Hoechst33258 染色)。3.流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。4.黃嘌呤氧化酶法測(cè)定總SOD 活力，TBA法測(cè)定MDA 含量。
　　 結(jié)果：1.DHA、EPA 對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2的細(xì)胞毒作用。在一定濃度DHA對(duì)HepG2 細(xì)胞的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用(P＜0.05)，而且隨著作

3、用時(shí)間延長(zhǎng)抑制率增加。24、48、和72h IC5 值分別是(160.87±2.13)μg/ml、(82.39±1.76)μg/ml、(70.71±1.52)μg/ml。同樣，在一定濃度EPA 對(duì)HepG2 細(xì)胞的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用(P＜0.01)，而且隨著作用時(shí)間延長(zhǎng)抑制率增加。24、48、和72h IC50 值分別是(89.09±1.56)μg/ml、(72.68±2.05)μg/ml、(56.4±1.38)μg/ml。
　

4、　 2.5-氟尿嘧啶聯(lián)用不同濃度DHA、EPA對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2的細(xì)胞毒性作用。本實(shí)驗(yàn)采用5-FU(5μg/ml)單用，及其分別和DHA(20、40、60μg/ml)、EPA(20、40、60μg/ml)聯(lián)用，與5-FU單用組比較，DHA、EPA聯(lián)用與5-FU單用相比可以明顯增加對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2毒性。因此，DHA和EPA有望成為化療輔助藥物。
　　 3.EPA和DHA 對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2 凋亡的影響。Hochest

5、33258 染色顯示對(duì)照組細(xì)胞核較大，表面光滑，較圓，細(xì)胞核發(fā)藍(lán)色熒光。在EPA和DHA(80μg/ml)分別預(yù)處理48h 后，細(xì)胞核染色密度增高呈半月形，并凝聚在核膜周邊，核仁裂解。
　　 4.流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。60、80μg/ml DHA作用48h后，HepG2細(xì)胞凋亡率分別為6.52[％]、14.67[％]。60、80μg/ml EPA作用48h后，HepG2細(xì)胞凋亡率分別為12.31[％]、32.12[％]，并且

6、隨著藥物濃度增加凋亡率升高。各濃度差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 5.EPA和DHA 對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2 總SOD 活力和MDA 含量的影響。各用藥組人肝癌細(xì)胞HepG2 總SOD 活力均有明顯降低(P＜0.05)，且80、100μg/ml l 濃度組比60μg/ml 濃度組EPA 或DHA 對(duì)細(xì)胞總SOD 活力具有更加明顯的降低作用(P＜0.05)。用80、100μg/ml l 濃度EPA 或DHA處理肝癌細(xì)胞后