藍(lán)銅蛋白分子內(nèi)電子傳遞機(jī)理研究.pdf

1、藍(lán)銅蛋白(Rusticyanin)是第Ⅰ類銅蛋白家族成員，是氧化亞鐵硫桿菌中鐵呼吸電子鏈中重要的組分。該蛋白分子內(nèi)的銅原子與Cys138，His85、His143以強(qiáng)健結(jié)合，與Met148以較弱的鍵結(jié)合，形成四面體結(jié)構(gòu)。Cys138和His85只是維持銅與蛋白結(jié)合的關(guān)鍵位點(diǎn)，Met148位點(diǎn)軸向配體對(duì)于氧化還原電子傳遞有一定的影響，但并不是控制氧化還原反應(yīng)的關(guān)鍵位點(diǎn)，His143位點(diǎn)目前對(duì)其的研究還很少，很可能是氧化還原的開關(guān)，但目前沒

2、有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道過。
　　本論文從嗜酸亞鐵氧化硫桿菌中克隆出藍(lán)銅蛋白基因，構(gòu)建了藍(lán)銅蛋白重組質(zhì)粒，并將其在大腸桿菌載體中表達(dá)，用親和一步層析方法純化。光譜學(xué)數(shù)據(jù)表明其能夠和IRO蛋白發(fā)生反應(yīng)，證明了目前亞鐵氧化系統(tǒng)電子傳遞的途徑：IRO和藍(lán)銅蛋白之間發(fā)生了電子傳遞。
　　本論文構(gòu)建了His143位點(diǎn)的定點(diǎn)突變質(zhì)粒，并將其在大腸桿菌中表達(dá)用鎳柱純化。通過聚丙烯酰胺凝膠電泳，光譜學(xué)數(shù)據(jù)確定143位點(diǎn)是藍(lán)銅蛋白與外界電子傳遞的關(guān)鍵位