華東地區(qū)雞白痢沙門氏菌的分離鑒定，分子流行病學(xué)及致病性研究.pdf

1、沙門氏菌是重要的人畜共患病原菌，目前報(bào)道的血清型已超過2500個(gè)，呈全球性分布。禽沙門氏菌病是由沙門氏菌屬一個(gè)或多個(gè)成員所引起的急性或慢性傳染病，臨床上多表現(xiàn)為敗血癥和腸炎等。雞白痢沙門氏菌是其中的一員，特異性感染雞，不同品種、日齡的雞只均可感染。在我國，雞白痢沙門氏菌病依然是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的傳染病之一。本研究對(duì)華東地區(qū)的活禽市場(chǎng)、某些動(dòng)物醫(yī)院涉及的禽源性沙門氏菌進(jìn)行了分離鑒定，并對(duì)其中雞白痢沙門氏菌的血清型、耐藥性和毒力基因進(jìn)行分析;

2、運(yùn)用病理組織學(xué)和免疫組織化學(xué)方法對(duì)雞白痢沙門氏菌分離株進(jìn)行致病性的研究。為研究雞白痢沙門氏菌的致病機(jī)制提供理論依據(jù)。
　　1.禽源沙門氏菌的分離鑒定及血清型分析
　　本文旨在研究我國華東地區(qū)沙門氏菌分布情況及其優(yōu)勢(shì)菌的血清型變異情況。對(duì)2010年10月至2012年8月來源于江蘇、安徽、上海等地區(qū)的禽源樣品，進(jìn)行增菌、純化、PCR鑒定、血清型鑒定及生化實(shí)驗(yàn)，并對(duì)7株血清型有變異的疑似雞白痢沙門氏菌進(jìn)行進(jìn)一步序列測(cè)定，對(duì)血清型進(jìn)

3、行分析。結(jié)果表明，本次調(diào)查中共分離沙門氏菌87株，傷寒沙門氏菌(2/87)、德爾卑沙門氏菌(4/87)、圣保羅沙門氏菌(1/87)、雞白痢沙門氏菌(78/87)及阿巴特圖巴沙門氏菌(2/87)并且在雞白痢沙門氏菌血清型H相存在Hd、Hg陽性的現(xiàn)象。結(jié)果提示，我國華東地區(qū)禽類沙門氏菌感染以雞白痢沙門氏菌為主，并存在血清型變異情況，變異概率呈上升趨勢(shì)。
　　2.雞白痢沙門氏菌的耐藥性分析
　　運(yùn)用K-B法對(duì)2010年10月至20

4、12年8月華東地區(qū)分離到的雞白痢沙門氏菌分離株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。結(jié)果表明，分離株對(duì)萘啶酸、羧芐青霉素、鏈霉素、磺胺異噁唑和氨芐西林等抗菌藥物具有較高的耐藥性，而對(duì)慶大霉素、頭孢曲松、氯霉素和卡那霉素具有較強(qiáng)敏感性。78個(gè)雞白痢沙門氏菌分離株中，62株為多重耐藥菌。
　　3.雞白痢沙門氏菌毒力基因的分子流行病學(xué)調(diào)查
　　為了解雞白痢沙門氏菌的相關(guān)毒力因子的流行病學(xué)變化，本研究參考相關(guān)文獻(xiàn)中擴(kuò)增毒力基因的引物，對(duì)位于78個(gè)雞白痢沙門

5、氏菌分離株的毒力島SPI-1、SPI-2、SPI-3、SPI-4、SPI-5上的毒力基因hilA、sseL、mgtC、siiE、sopB進(jìn)行PCR檢測(cè)，并篩選10株分別來源于雞、鴨、鵝、鴿源的的分離株進(jìn)行測(cè)序分析。結(jié)果顯示78株雞白痢沙門氏菌均攜帶5個(gè)毒力基因，位于SPI-1、SPI-2及SPI-3的hilA、sseL、mgtC基因高度保守(100％)，而位于SPI-4、SPI-5的siiE和sopB基因在個(gè)別位點(diǎn)出現(xiàn)突變。
　　

6、4.雞白痢沙門氏菌的致病性研究
　　在所分離的雞白痢沙門氏菌中，根據(jù)時(shí)間、地點(diǎn)篩選12株具有代表性的分離株進(jìn)行動(dòng)物致死性感染實(shí)驗(yàn)，并篩選2株致病性強(qiáng)的分離株進(jìn)行半數(shù)致死實(shí)驗(yàn)及動(dòng)物定居實(shí)驗(yàn)，經(jīng)口服接種，分別在第3天、7天、14天、21天、28天對(duì)SPF雞的肝、脾、盲腸、法氏囊進(jìn)行細(xì)菌分離和病理組織和免疫組化學(xué)研究。結(jié)果顯示分離株接種后第3天實(shí)驗(yàn)雞出現(xiàn)病變，第7-14天病變最為嚴(yán)重，第21天后病變明顯好轉(zhuǎn)。感染過程中各組織中沙門氏菌數(shù)