油菜葉片組織培養(yǎng)體系建立及葉綠體表達(dá)載體的構(gòu)建.pdf

1、油菜是世界上重要的油料作物之一，通過(guò)基因工程手段改良油菜農(nóng)藝性狀和創(chuàng)制油菜新種質(zhì)，對(duì)培育油菜新品種具有重要意義。一套高效的組織培養(yǎng)體系是植物基因工程技術(shù)能夠成功應(yīng)用的重要前提和基礎(chǔ)，本研究以2個(gè)甘藍(lán)型油菜品系的子葉和葉片為外植體，研究影響外植體再生的因素，為轉(zhuǎn)化篩選培養(yǎng)體系建立基礎(chǔ);植物表達(dá)載體直接關(guān)系到外源基因的轉(zhuǎn)化效率、表達(dá)情況和遺傳穩(wěn)定性，以及轉(zhuǎn)基因植物的安全性等問(wèn)題，因此，表達(dá)載體的構(gòu)建在植物基因工程研究中占據(jù)重要地位，也是獲得

2、有應(yīng)用價(jià)值轉(zhuǎn)基因植株的基礎(chǔ)。
　　 本研究通過(guò)擴(kuò)增外源重組片段，構(gòu)建油菜葉綠體轉(zhuǎn)化表達(dá)載體，為后續(xù)研究提供資料。主要研究?jī)?nèi)容包括：⑴篩選適合葉綠體轉(zhuǎn)化外植體的基因型。比較F4和T15兩個(gè)品系子葉的組織培養(yǎng)特性及愈傷誘導(dǎo)率、褐化率和成苗率。兩個(gè)品系愈傷誘導(dǎo)差異不顯著，相同培養(yǎng)條件下F4成苗率高于T15; F4的愈傷顏色較綠、致密，具有較強(qiáng)的分化能力。F4比T15更適合作為轉(zhuǎn)化篩選的外植體供試品系。⑵油菜再生體系的建立。以F4和T1

3、5的子葉以及F4葉片為材料，分析了影響油菜離體培養(yǎng)的關(guān)鍵因素。研究表明：①最佳分化培養(yǎng)基為MS+4 mg/L6-BA+0.5 mg/L NAA，成苗率最高可達(dá)28.1％；②F4品系四種不同苗齡葉片的狀態(tài)相比較，第22 d葉片的愈傷誘導(dǎo)狀態(tài)最好；③生根培養(yǎng)基為1/2 MS+1 mg/L IBA，生根率可達(dá)100％，此生根培養(yǎng)基生根時(shí)間快，根系發(fā)達(dá)。⑶構(gòu)建油菜葉綠體表達(dá)載體。本研究中，同源重組片段為rbcL和accD，將外源基因EPSPS、