廣東省規(guī)?；i場(chǎng)豬圓環(huán)病毒感染情況及分子特征研究.pdf

1、豬圓環(huán)病毒分為豬圓環(huán)病毒1型(PCV1)和豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)兩種類型，近年來的研究發(fā)現(xiàn)PCV2與一系列豬的綜合征有關(guān)。PCV2由于引起PCVAD而受到廣泛關(guān)注，而PCV1在豬群中的感染情況近年來很少有人研究。
　　 為了解廣東省豬圓環(huán)病毒的最新流行情況和廣東省病豬群PCV2的感染情況及其與PRRSV的相關(guān)性，本研究采集了廣東省11個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)各飼養(yǎng)階段豬血清807份，用套式PCR(nPCR)檢測(cè)PCV1利PCV2；采集了若

2、干豬場(chǎng)2010年1月至2012年2月間有咳嗽，喘氣，消瘦及疑似PDNS等臨床癥狀的豬血清312份和來自實(shí)驗(yàn)室豬病門診疑似PCVAD的病豬血清樣品343份(以下稱病豬)，以及無臨床癥狀豬血清104份(以下稱健康豬)，以nPCR檢測(cè)PCV2，以一步法反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)檢測(cè)豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)所調(diào)查的11個(gè)規(guī)模豬場(chǎng)中只有5個(gè)檢出PCV1，所有豬場(chǎng)均檢出PCV2。PCV2陽性率為30.61％，而PCV1陽性率

3、僅為4.21％；經(jīng)產(chǎn)母豬和7周齡以上保育豬PCV陽性率最高；病豬血清PCV2陽性率為59.1％，PRRSV陽性率為43.8％，PCV2陽性豬群中有41.6％的豬同時(shí)感染PRRSV；病豬群10～12月的PCV2感染率最高，而1～3月最低；健康豬血清PCV2陽性率為37.5％，PRRSV陽性率為3.29％，PCV2與PRRSV無混合感染。證明PCV尤其是PCV2在華南地區(qū)仍廣泛傳播并流行，而且PCV2與PRRSV混合感染致病情況較多。PCV

4、2的感染率與季節(jié)有一定的相關(guān)性，種豬帶毒情況嚴(yán)重。
　　 為了解疫苗免疫與否對(duì)豬只抗體水平的影響，初步評(píng)估疫苗免疫的效果及保護(hù)力，了解免疫斤PCV2抗體的消長規(guī)律及免疫壓力下PCV2的變異情況，本研究按生長階段不同采集免疫PCV2疫苗豬場(chǎng)(免疫場(chǎng))和不免疫PCV2疫苗豬場(chǎng)(非免疫場(chǎng))的豬全血樣本798份進(jìn)行PCV2抗體和抗原檢測(cè)，對(duì)部分陽性樣品擴(kuò)增全基因序列進(jìn)行序列分析。凋查發(fā)現(xiàn)免疫場(chǎng)公豬PCV2抗體陽性率達(dá)到100％，經(jīng)產(chǎn)母豬

5、PCV2抗體陽性率達(dá)到98.5％，而非免疫場(chǎng)公豬抗體陽性率為75％，經(jīng)產(chǎn)母豬抗體陽性率達(dá)到91.3％，免疫場(chǎng)抗體陽性率高于非免疫場(chǎng)，說明進(jìn)行PCV2疫苗免疫可以提高豬場(chǎng)PCV2的抗體水平。病毒檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)免疫場(chǎng)經(jīng)產(chǎn)母豬PCV2陽性率僅為8.46％，而非免疫場(chǎng)經(jīng)產(chǎn)母豬PCV2陽性率達(dá)到24.3％，說明疫苗免疫對(duì)降低PCV2的感染率有一定的效果。分別對(duì)比經(jīng)產(chǎn)母豬，公豬和后備母豬的抗體和病毒感染情況發(fā)現(xiàn)二者并不相符，三者抗體陽性率均遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于病

6、毒感染率，證明對(duì)經(jīng)產(chǎn)母豬，公豬和后備母豬的PCV2抗體情況調(diào)查并不能說明PCV2的感染情況。仔豬PCV2抗體和病毒感染情況隨著周齡的升高呈現(xiàn)出規(guī)律性的變化，其中抗體有兩個(gè)高峰，即1～3周齡和6～10周齡，病毒感染率在6周齡之后呈升高趨勢(shì)。免疫場(chǎng)仔豬PCV2感染率明顯低于非免疫場(chǎng)的感染率，說明母豬免疫對(duì)仔豬有一定的保護(hù)作用。對(duì)免疫場(chǎng)和非免疫場(chǎng)PCV2全基因序列分析發(fā)現(xiàn)他們與法國(AF055393)和加拿大(DQ220730)的毒株序列相比

7、具有較高的同源性，最高分別達(dá)到98.6％和98.5％，本研究分離到的毒株與國內(nèi)毒株具有較近的親緣關(guān)系，免疫豬場(chǎng)毒株序列有所變化。
　　 現(xiàn)有PCR方法只能檢測(cè)到PCV2的存在而不能區(qū)分基因亞型。傳統(tǒng)分型方法須經(jīng)測(cè)序和序列比對(duì)，過程繁瑣，成本較高。本文根據(jù)PCV2a和PCV2b的序列特點(diǎn)，設(shè)計(jì)合成了3條引物，建立起了區(qū)分PCV2a和PCV2b基因型的PCR方法。試驗(yàn)結(jié)果表明該方法敏感性、特異性較強(qiáng)，適合用于PCV2基因亞型的檢測(cè)。

8、同時(shí)，本研究利用該P(yáng)CR方法對(duì)廣東省多家規(guī)?；i場(chǎng)的豬血清樣本進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PCV2在廣東省健康豬群中的感染率為31.5％，在病豬群中的感染率達(dá)到42.1％，其中PCV2b成為主要的基因型，PCV2a僅存在少量感染，存在同一頭豬同時(shí)感染PCV2a和PCV2b的情況。說明PCV2b已經(jīng)成為廣東省的流行毒株。
　　 為了解廣東地區(qū)PCV2的流行毒株及其變異情況，從2010年～2012年廣東省23份疑似PCVAD病豬血清中分離P

9、CV2病毒，用PCR和間接免疫熒光方法對(duì)這些毒株進(jìn)行檢測(cè)，并以PCR方法擴(kuò)增得到其全基因序列進(jìn)行序列分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)分離得到了23株P(guān)CV2流行毒株，其中有2株1766bp的毒株，其他均為1767bp的毒株。這些毒株與GenBank中其他PCV2全基因序列的同源性在94.2％-99％之間，毒株間同源性在94.5％-99％之間。對(duì)其基因組特征以及毒株之間的親緣關(guān)系進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)廣東分離株與國內(nèi)流行毒株之間的親緣關(guān)系密切，但也存在一定的差異。同