小鼠排卵前卵泡閉鎖過(guò)程中FSH對(duì)FOXO1基因的表達(dá)調(diào)控.pdf

1、在哺乳動(dòng)物整個(gè)卵巢的發(fā)育和功能發(fā)揮中，卵泡閉鎖是一個(gè)非常精密且周期性進(jìn)行的過(guò)程，閉鎖可以破壞和消除卵巢中的卵泡和卵母細(xì)胞。卵泡閉鎖是一個(gè)很普遍的生理過(guò)程，人類在從胎兒到絕經(jīng)期的發(fā)育過(guò)程中估計(jì)有99.9％的卵母細(xì)胞因閉鎖而被損失掉。當(dāng)卵泡發(fā)育至排卵前卵泡，若沒(méi)有排卵則發(fā)生閉鎖。一般認(rèn)為出生后的卵泡閉鎖是由于卵泡中的顆粒細(xì)胞凋亡引起的，但對(duì)于排卵前卵泡的閉鎖機(jī)制目前研究的還不是很清楚。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)小鼠進(jìn)行激素處理,使小鼠卵巢中的多數(shù)卵泡能夠

2、在相同的時(shí)期同步發(fā)育至排卵前卵泡的階段。由于卵泡排卵需要黃體生成素（LH)的刺激，因此在未使用LH進(jìn)行刺激的情況下發(fā)育至排卵前卵泡階段的這些卵泡變發(fā)生了閉鎖，從而成功的構(gòu)建了大卵泡閉鎖的模型。通過(guò)定量PCR、石蠟切片、凋亡染色、蛋白質(zhì)印跡、染色質(zhì)免疫沉淀和熒光染色等技術(shù)，本實(shí)驗(yàn)研究了在大卵泡閉鎖過(guò)程中FSH對(duì)卵泡閉鎖的影響以及FSH對(duì)顆粒細(xì)胞中一些重要調(diào)節(jié)因子的作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:
　　1)通過(guò)對(duì)在閉鎖過(guò)程中不同時(shí)期所取得的卵巢切

3、片進(jìn)行TUNEL染色，結(jié)果表明隨著閉鎖時(shí)間的延長(zhǎng)，卵泡中顆粒細(xì)胞的凋亡也越來(lái)越嚴(yán)重。在卵泡閉鎖的過(guò)程中若對(duì)小鼠進(jìn)行FSH刺激則可抑制閉鎖卵泡中顆粒細(xì)胞的凋亡，從實(shí)驗(yàn)結(jié)果中我們還可以看出排卵前卵泡的閉鎖屬于腔部閉鎖類型，卵泡中的顆粒細(xì)胞是從最接近卵泡腔部分開(kāi)始發(fā)生凋亡的。
　　2)運(yùn)用RT-PCR技術(shù)，本研究對(duì)閉鎖卵泡顆粒細(xì)胞中Caspase家族成員的表達(dá)變化進(jìn)行了研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在卵泡閉鎖和FSH對(duì)閉鎖卵泡的挽救過(guò)程中Caspa

4、se-8的表達(dá)沒(méi)有明顯的變化而Caspase-9和Caspase-3則隨卵泡狀態(tài)的不同表現(xiàn)出不同的表達(dá)水平。根據(jù)結(jié)果我們推測(cè)顆粒細(xì)胞的凋亡可能是由線粒體凋亡通路所介導(dǎo)的。
　　3)通過(guò)RT-PCR比較了在閉鎖卵泡和健康卵泡中FoxO1基因的表達(dá)水平，結(jié)果表明在閉鎖的卵泡中FoxO1的表達(dá)要高于在健康卵泡中。根據(jù)結(jié)果還可以看出FSH對(duì)閉鎖卵泡中FoxO1的表達(dá)有明顯的抑制作用。FoxO1蛋白表現(xiàn)出與mRNA相同的變化規(guī)律。
　

5、　4)對(duì)體外培養(yǎng)的顆粒細(xì)胞進(jìn)行FSH刺激可以促使位于胞核中的ERalpha向胞質(zhì)中轉(zhuǎn)移。通過(guò)染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)可以看出在閉鎖卵泡顆粒細(xì)胞中ERalpha在FoxO1基因啟動(dòng)子區(qū)有較多的募集，而在FSH挽救顆粒細(xì)胞凋亡的過(guò)程中FSH可以抑制ERalpha蛋白在FoxO1基因上的聚集作用。
　　因此，排卵前卵泡發(fā)生閉鎖的部分原因有可能是卵泡顆粒細(xì)胞中FoxO1基因表達(dá)量的升高以及翻譯后蛋白量的增加，而FSH對(duì)閉鎖卵泡的挽救作用有可能是