豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)SN07-12株滅活疫苗的研究.pdf

1、2007年12月，上海市農業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所從蘇南地區(qū)一發(fā)病豬場采集病料，分離到一株PCV2病毒，命名為SN07-12株，在此基礎上進行了全病毒滅活苗的研制，論文主要內容如下:
　　 1.豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)SN07-12株的優(yōu)化培養(yǎng)。本試驗通過調整PK15細胞濃度，優(yōu)化收毒時間等方法，在連續(xù)傳代的過程中獲得較高滴度的SN07-12株病毒培養(yǎng)物。并通過試驗表明，收獲液上清中含有較高效價的病毒量，調節(jié)PCV2吸附階段、培

2、養(yǎng)階段的培養(yǎng)基血清含量，血清含量由常規(guī)工藝的8％降為2％,利用新工藝生產的3批病毒效價與傳統(tǒng)工藝相當，說明新工藝批次差異小，可以作為PCV2的生產工藝。
　　 2.聚合酶鏈式反應(PCR)和間接免疫熒光法(IFA)測定豬圓環(huán)病毒2型半數(shù)細胞培養(yǎng)感染量(TCID50)的比較。初步比較兩種方法測定病毒滴度的差異，并采用熒光定量PCR（Real-time PCR）法對試驗結果進行驗證。結果表明IFA法比PCR法敏感準確，更適宜用于測定

3、PCV2的效價。
　　 3.不同滅活方法對豬圓環(huán)病毒2型SN07-12株滅活效果的研究。采用終濃度為0.1％和0.2％的二乙烯亞胺(BEI)、0.1％和0.2％的甲醛對PCV2滅活，不同時間點取樣，IFA檢測病毒滅活效果。結果顯示，蛋白質印跡試驗中，BEI滅活組PCV2抗原蛋白陽性信號明顯強于甲醛滅活組。首次證明，BEI對PCV2表面蛋白破壞小，能夠更好的保留其抗原性，而且對滅活時間做了充分明確的研究，為新型PCV2疫苗的研制奠

4、定基礎。
　　 4.豬圓環(huán)病毒2型(PCV2) SN07-12株感染BALB/c小鼠的研究。本試驗結果發(fā)現(xiàn)，PCV2-SH株可以感染BALB/c小鼠，為利用無PCV2感染的BALB/c小鼠來研究PCV2的致病機理和為今后建立合適的動物發(fā)病模型提供理論參考。
　　 5.豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)SN07-12株全病毒滅活苗的研制及其免疫效力的研究。使用0.1％BEI滅活2％血清培養(yǎng)的病毒液32h，IFA檢測完全滅活，與IS