山東省番茄黃化曲葉病毒和番茄抗病基因的分子鑒定.pdf

1、番茄黃化曲葉病毒(tomato yellow leaf curl virus，TYLCV)屬于雙生病毒科(Geminiviridae)菜豆金色花葉病毒屬（Begomovirus），該病毒主要通過(guò)煙粉虱（Bemisiatabaci）傳播。各地研究報(bào)道表明番茄黃化曲葉病毒病(tomato yellow leaf curl disease，TYLCD)已對(duì)我國(guó)各地的番茄生產(chǎn)造成嚴(yán)重危害。
　　 本實(shí)驗(yàn)從山東省受番茄黃化曲葉病毒病危害的

2、10個(gè)地區(qū)采集了10份番茄感病植株葉片樣品。各地樣品經(jīng)DNA提取、PCR擴(kuò)增、TA克隆、序列測(cè)定、序列同源性比對(duì)及系統(tǒng)進(jìn)化分析等一系列分子實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)，結(jié)果表明山東各地種植番茄所感染的番茄黃化曲葉病毒基因組DNA(DNA-A)為單鏈環(huán)狀DNA分子，各地番茄黃化曲葉病毒分離物全長(zhǎng)序列均包括2781個(gè)核苷酸，共編碼6個(gè)開(kāi)放式閱讀框(ORF)，各地序列間同源性在98.53％以上。系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析表明山東各地病毒分離物之間序列同源性雖然非常高，但

3、是仍可以分為兩個(gè)類(lèi)群。將山東各地病毒分離物基因組全長(zhǎng)序列在GeneBank上經(jīng)nucleotide blast比對(duì)后分析發(fā)現(xiàn)與我國(guó)上海、江蘇、安徽等地報(bào)道的番茄黃化曲葉病毒序列同源性在98.0％以上。系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析表明山東地區(qū)番茄黃化曲葉病毒分離物屬于以色列番茄黃化曲葉病毒(TYLCV-ISR)株系。
　　 利用雙生病毒衛(wèi)星DNA特異性擴(kuò)增引物，對(duì)山東各地所采集病毒分離物樣品的衛(wèi)星DNA(DNAβ)進(jìn)行PCR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明山

4、東各地番茄黃化曲葉病毒分離物均為單組份DNA，并不合有DNAβ。
　　 搜集了4份已用于生產(chǎn)的抗番茄黃化曲葉病毒病番茄材料，利用已報(bào)道的分子標(biāo)記技術(shù)，合成了3對(duì)特異性引物，分別對(duì)與抗番茄黃化曲葉病毒病相關(guān)的Ty-1，Ty-2和Ty-3基因進(jìn)行了PCR擴(kuò)增篩選，根據(jù)擴(kuò)增出的不同特異性條帶大小及數(shù)量，可快速鑒定番茄材料所具有的基因型（Ty-1/Ty-1，Ty-1/ty-1，ty-1/ty-1，Ty-2/Ty-2，Ty-2/ty-2，