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文檔簡介
1、豬圓環(huán)病毒Ⅱ型(PCV2)屬于圓環(huán)病毒科(Circoviridael)圓環(huán)病毒屬,可引起豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合癥(PMWS),給世界養(yǎng)豬業(yè)造成相當大的經(jīng)濟損失。 本研究中將原核表達PCV2開放閱讀框架2(ORF2)的兩段蛋白(GST-PCV737-421;GST-PCV421-37)的重組菌pGEX-PCV737-421與pGEX-PCV421-37在含氨芐青霉素的2xYT培養(yǎng)基中進行誘導表達,收集菌液,超聲波裂解,經(jīng)聚丙烯酰胺
2、凝膠電泳(SDS-PAGE),切下含目的蛋白的膠條,免疫BALB/c小鼠來制備單克隆抗體,經(jīng)間接免疫熒光抗體試驗(IFA)來篩選陽性克隆,再采用有限稀釋法進行亞克隆,最終得到20株陽性單克隆。采用抗體亞類鑒定試劑盒對單抗的重鏈和輕鏈進行鑒定,確定了單抗的部分生物學特性,經(jīng)IFA與WesternBlotting檢測,所得到的20株單抗中有3株細胞為PCV2型特異性地單抗,它們?yōu)?B7-B1、9B6-A7和9E2-A10,其余17株細胞為P
3、CV1與PCV2共反應單抗。將陽性單克隆擴大培養(yǎng)后注射12周齡經(jīng)產健康雌性BALB/c小鼠來采取腹水,經(jīng)IFA檢測確定效價。挑選26H5-A3與9B6-A7單抗分別來做包被抗體,初步建立抗原捕獲ELISA方法。 實驗結果表明所篩選得到的20株陽性單克隆細胞抗體分泌穩(wěn)定,所建立的抗原捕獲ELISA方法采用單抗包被,多抗夾心,能夠很好的將PCV2、PCV1與豬細小病毒(PPV)、偽狂犬病毒(PRV)、豬繁殖呼吸障礙綜合征病毒(PRR
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