辣椒胞質(zhì)雄性不育主效恢復(fù)基因的遺傳分析及分子標(biāo)記研究.pdf

1、辣椒(Capsicum annuum L.)是一種重要的蔬菜作物。辣椒雜種優(yōu)勢(shì)明顯,雜交品種在生產(chǎn)上有廣泛的應(yīng)用。目前辣椒雜交種子的生產(chǎn)主要依靠人工去雄和人工授粉,應(yīng)用辣椒胞質(zhì)雄性不育三系配套制種可以降低勞動(dòng)力成本,保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)并能提高種子的純度。但應(yīng)用三系配套育種中存在著胞質(zhì)雄性不育恢復(fù)系轉(zhuǎn)育困難的問(wèn)題。若找到與辣椒育性恢復(fù)基因Rf(fertility restorer)緊密連鎖的標(biāo)記,則可進(jìn)一步利用染色體步移技術(shù)克隆Rf基因從而通過(guò)

2、轉(zhuǎn)基因的方法轉(zhuǎn)育恢復(fù)系。因此本文對(duì)辣椒胞質(zhì)雄性不育恢復(fù)性的遺傳進(jìn)行了一定的分析,篩選了大量分子標(biāo)記并利用基因組比較的方法開(kāi)發(fā)標(biāo)記。
　　 1.對(duì)2862株分離群體77013A×(Yolo Wonder×Perennial)進(jìn)行單株育性調(diào)查。調(diào)查結(jié)果顯示,可育單株與不育單株比例并不完全符合由單一基因控制育性恢復(fù)的遺傳比例。環(huán)境因素對(duì)胞質(zhì)不育的育性恢復(fù)具有一定的影響。
　　 2.共計(jì)篩選了1366對(duì)引物,其中1對(duì)SCAR標(biāo)記

3、,5對(duì)CAPS標(biāo)記,417對(duì)SSR標(biāo)記,495對(duì)SRAP標(biāo)記和448對(duì)AFLP標(biāo)記。找到一個(gè)同恢復(fù)基因連鎖的SCAR標(biāo)記。其中,在2862株分離群體中驗(yàn)證SACR-CRF標(biāo)記,1419株表現(xiàn)為含有顯性條帶(約500bp)同Rf基因連鎖,1443株表現(xiàn)為無(wú)條帶同rf基因連鎖,不清晰無(wú)法確定的有2株,x2=0.236,P=0.627,與預(yù)期的1:1的比例相符合。經(jīng)過(guò)同前200株育性調(diào)查結(jié)果分析和Joinmap4.0軟件計(jì)算,SCAR標(biāo)記與恢

4、復(fù)基因Rf的連鎖距離為4.3cM。
　　 3.在35份材料中驗(yàn)證SACR-CRF標(biāo)記,分子標(biāo)記顯示結(jié)果與材料恢復(fù)性表型完全一致。
　　 4.將已經(jīng)克隆的其他Rf廠基因與辣椒已經(jīng)公布的EST和番茄測(cè)序的基因組比對(duì),在辣椒上得到6條相似度較高的EST序列,根據(jù)此6條EST序列設(shè)計(jì)43對(duì)引物進(jìn)行篩選。根據(jù)相似度較高區(qū)段選擇番茄T6染色體上的標(biāo)記進(jìn)行篩選。將SCAR-CRF標(biāo)記的特異擴(kuò)增片段進(jìn)行測(cè)序,片段長(zhǎng)度為556bp,比對(duì)番