轉(zhuǎn)pprⅠ基因甘藍(lán)型油菜干旱脅迫耐受性應(yīng)答研究.pdf

1、植物在生長發(fā)育的各個(gè)階段往往受到生物或非生物脅迫。在非生物脅迫中，干旱是影響植株生長發(fā)育的環(huán)境因子之一，會影響植物的生長發(fā)育、新陳代謝等，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致植物死亡。pprⅠ基因是從耐輻射奇球菌中克隆的一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子，具有很強(qiáng)的干燥抗性和電離輻射抗性，廣泛的參與了和脅迫響應(yīng)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、信號傳導(dǎo)、能量代謝等相關(guān)的基因表達(dá)調(diào)控過程。
　　本研究以甘藍(lán)型油菜為材料，通過農(nóng)桿菌的介導(dǎo)獲得轉(zhuǎn)pprⅠ基因植株。以非轉(zhuǎn)基因?yàn)閷φ?，進(jìn)行干旱脅迫實(shí)驗(yàn)，研究

2、轉(zhuǎn)pprⅠ基因與非轉(zhuǎn)基因甘藍(lán)型油菜對干旱脅迫的耐受性應(yīng)答情況，探究pprⅠ基因的導(dǎo)入能否增強(qiáng)油菜的抗旱能力，為作物抗逆研究、培育抗逆新品種提供新思路，得到如下的研究結(jié)果:
　　1通過農(nóng)桿菌浸染外植體及后續(xù)的抗生素篩選得到有卡那霉素抗性的油菜幼苗167株，浸染轉(zhuǎn)化率為0.53％;將得到的抗性幼苗進(jìn)行PCR、Real-timePCR及Northern雜交等分子鑒定得到轉(zhuǎn)基因陽性植株70株，陽性檢出率為42％。
　　2用0％、5％

3、、10％、15％、20％、25％的PEG-6000溶液處理轉(zhuǎn)pprⅠ基因與非轉(zhuǎn)基因油菜種子6d，研究種子的萌發(fā)率、胚根長、胚芽長及單株鮮重。研究結(jié)果表明，隨著PEG濃度的增大，種子萌發(fā)受到的抑制越明顯，萌發(fā)率逐漸降低，PEG濃度為25％時(shí)兩者均不能萌發(fā)，但轉(zhuǎn)pprⅠ基因油菜種子的萌發(fā)率高于非轉(zhuǎn)基因油菜種子，轉(zhuǎn)基因種子的PEG最大耐受濃度為20％，而非轉(zhuǎn)基因種子的最大耐受濃度為15％;萌發(fā)種子的胚根長度、胚芽長度會隨著PEG濃度的增大而減

4、小，單株鮮重減少，但轉(zhuǎn)基因油菜種子受到的抑制低于非轉(zhuǎn)基因油菜種子，轉(zhuǎn)pprⅠ基因油菜種子表現(xiàn)出更好的耐旱性。
　　3干旱脅迫耐受性研究中，隨著脅迫時(shí)間的延長，油菜植株的葉片相對含水量和葉綠素含量逐漸降低，丙二醛含量逐漸升高，可溶性蛋白含量呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢，超氧化物歧化酶活性及過氧化物酶活性都呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，但轉(zhuǎn)基因植株的各項(xiàng)指標(biāo)均優(yōu)于非轉(zhuǎn)基因油菜，說明轉(zhuǎn)基因油菜植株較非轉(zhuǎn)基因植株表現(xiàn)出更強(qiáng)的耐旱能力。
　　4恢