蛹蟲草類胡蘿卜素對小鼠生長、免疫和抗氧化性能的影響.pdf

1、本文優(yōu)化了蛹蟲草類胡蘿卜素的提取方法，利用動物試驗和細胞培養(yǎng)試驗研究了蛹蟲草類胡蘿卜素提取物(CMCE)對小鼠生長、免疫、抗氧化性能的影響以及對癌細胞增殖的抑制作用，研究包含三個部分，共四個試驗，試驗過程和結(jié)果分別摘要如下:
　　第一部分試驗以蛹蟲草類胡蘿卜素的提取得率為考察指標，分別運用酸熱提取法、超聲提取法、酸熱超聲提取法、微波提取法、酸熱微波提取法、丙酮提取法提取類胡蘿卜素，比較這6種方法的提取得率，得出酸熱超聲提取法是較好

2、的提取方法。采用酸熱超聲提取法，設(shè)鹽酸濃度、酸浸時間、沸水浴時間、超聲功率、超聲溫度和超聲時間等6個單因素試驗，結(jié)合L27(313)正交試驗設(shè)計，優(yōu)化提取工藝參數(shù)。結(jié)果表明:1）得出酸熱超聲提取法的較優(yōu)提取條件為鹽酸濃度2.25 mol/L，酸浸時間30 min，沸水浴時間6 min，超聲功率400 W，超聲溫度25℃，超聲時間25 min;2）蛹蟲草類胡蘿卜素提取得率為1105.53μg/g，比優(yōu)化前提高12.12％;3）影響提取得率

3、大小的因素依次為超聲功率、酸浸時間、鹽酸濃度、沸水浴時間、超聲溫度、超聲時間。
　　第二部分采用體內(nèi)試驗方法分別探討了以不同濃度CMCE以及不同種類的類胡蘿卜素灌喂小鼠后對其生長、免疫和抗氧化性能的影響，包括兩個試驗，如下:
　　試驗一探究了不同濃度的CMCE對小鼠生長、免疫以及抗氧化性能的影響。將120只ICR小鼠隨機分為4組，分別灌喂0mg/mL（對照組）、2mg/mL（低濃度組）、4mg/mL（中濃度組）和8mg/mL

4、（高濃度）的CMCE溶液0.2mL/只/天。結(jié)果表明:1）與對照組相比，在正試期14d時，低濃度和中濃度組ADG極顯著提高(P＜0.01)，低濃度組F/G顯著降低（P＜0.05）;而從整個試驗期來看，中、低濃度組的ADFI顯著高于對照組（P＜0.05），ADG極顯著高于對照組(P＜0.01)，F(xiàn)/G極顯著低于對照組（P＜001）;灌喂低濃度和中濃度CMCE能提高小鼠DM消化率（P＞0.05）以及血清CHO(P＞0.05)和TG含量（P＜

5、0.05），能提高小鼠十二指腸的絨毛高度/隱窩深度(V/C)比值;2）低濃度組和中濃度組小鼠脾臟TNF-αmRNA的相對表達量極顯著高于對照組(P＜0.01);而灌喂高濃度的CMCE能提高小鼠血清IgG的含量（P＜0.01）以及小鼠脾臟IL-2 mRNA的相對表達量（P＜0.01），能降低小腸三個區(qū)段的V/C比值;3）低濃度組小鼠血清CAT和GSH-Px活性極顯著高于對照組和另外兩個處理組（P＜0.01）;中濃度組小鼠血清MDA的含量顯

6、著高于高濃度組(P＜0.05);低濃度組小鼠肝臟SOD活性顯著高于對照組（P＜0.05）;肝臟CAT活性隨灌喂CMCE濃度的升高而增強，并且高濃度組小鼠肝臟CAT活性顯著高于對照組（P＜0.05）;
　　試驗二探究了三種不同的類胡蘿卜素對小鼠生長、免疫和抗氧化性能的影響。48只ICR小鼠隨機分為4組，分別灌喂大豆油溶液（A組，對照組）、β-胡蘿卜素溶液（B組）、葉黃素溶液（C組）和CMCE溶液（D組）0.2mL/只/天。結(jié)果表明:

7、1）就整個試驗期來看，D組小鼠ADFI顯著高于對照組（P＜0.05），ADG和F/G各組之間無顯著差異（P＞0.05）;D組小鼠血清GLU和CHO的含量分別極顯著（P＜0.01）和顯著（P＜0.05）高于對照組，B和C組小鼠血清TG含量分別顯著(P＜0.05)和極顯著（P＜0.01)高于D組;2）B組小鼠血清IgG含量顯著高于D組（P＜0.05）;D組小鼠血液WBC，Lymph極顯著高于對照組(P＜0.01)，Mon和Mon％顯著高于對

8、照組(P＜0.05);B組小鼠脾臟IL-2 mRNA的相對表達量顯著高于對照組（P＜0.05），D組小鼠脾臟IL-4和TNF-α mRNA的相對表達量顯著高于對照組和C組（P＜0.05）;3）B組小鼠血清SOD活性顯著高于C和D組(P＜0.05)，血清CAT和GSH-Px活性分別顯著（P＜0.05）和極顯著（P＜0.01）高于D組;C組小鼠血清GSH-Px活性極顯著高于其他三組(P＜0.01);C，D組小鼠血清MDA含量極顯著低于B組和

9、對照組（P＜0.01）;相比于血清抗氧化指標，肝臟中SOD、CAT以及GPX1基因mRNA的相對表達量，各組之間無顯著差異（P＞0.05）。
　　第三部分試驗采用體外細胞培養(yǎng)的方法來探究經(jīng)初步純化后的CMCE對兩種腫瘤細胞（胃癌細胞MGC80-3和肝癌細胞HepG2）增殖的抑制作用。經(jīng)過硅膠柱層析初步純化后，CMCE中類胡蘿卜素的含量提高了12倍，再用細胞培養(yǎng)液將其配制成不同的濃度，分別為:60，80，100，120和140μg/

10、mL。同時以順鉑作為陽性對照，以不含藥物的細胞培養(yǎng)液為陰性對照開展試驗。結(jié)果表明:1）作用24h后，CMCE對MGC80-3細胞增殖的抑制作用呈濃度依賴性上升;48h和72h后，80和100μg/mL的CMCE對MGC80-3細胞增殖的抑制作用較強。2）對HepG2來說，與藥物共培養(yǎng)24h后，較高濃度的CMCE對HepG2細胞增殖的抑制作用較好;48h后，CMCE對HepG2細胞增殖的抑制作用呈濃度依賴性上升;72h后，120μg/mL