發(fā)根農(nóng)桿菌介導(dǎo)的Bt基因Cry8e轉(zhuǎn)化大豆抗蠐螬研究.pdf

1、大豆既是糧食作物，又是經(jīng)濟(jì)作物，也是工業(yè)原料，是重要的植物蛋白資源和食用油料，但是大豆害蟲是影響大豆產(chǎn)量和質(zhì)量的一個(gè)重要因素。為了防止蟲害大量的使用殺蟲劑，不僅對人和動(dòng)物有害，也造成環(huán)境的污染。而且長期使用化學(xué)藥劑也易使害蟲產(chǎn)生抗藥性，從而降低防效，造成害蟲猖獗。
　　 金龜子類幼蟲——蠐螬是一類世界性難防治的重要地下害蟲，占地下害蟲總量的80％以上。據(jù)近年來的調(diào)查，蠐螬的危害已排在各類地下害蟲之首。因此，尋找抗金龜子類害蟲的B

2、t殺蟲蛋白基因并加以開發(fā)利用，生產(chǎn)生物工程殺蟲劑和轉(zhuǎn)基因植物，有效防治害蟲已成為有關(guān)國民經(jīng)濟(jì)健康發(fā)展的大事，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)使植物表達(dá)抗蟲基因防治害蟲則是綜合防治害蟲的重要途徑之一。
　　 大量研究表明，大豆是一種較難轉(zhuǎn)化的植物，而基因型是影響轉(zhuǎn)化效率的最主要因素之一。本研究利用發(fā)根農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)，對大豆不同基因型進(jìn)行轉(zhuǎn)化比較，優(yōu)化轉(zhuǎn)化平臺(tái)，以期獲得轉(zhuǎn)化效率較高的轉(zhuǎn)化條件和基因型，為后期大豆整株轉(zhuǎn)化，獲得抗蠐螬轉(zhuǎn)基因植株打

3、下基礎(chǔ)。同時(shí)利用獲得陽性根進(jìn)行分子檢測和生物活性檢測，均獲得較好結(jié)果。其主要工作結(jié)果如下：
　　 1．構(gòu)建含Cry8e基因的植物表達(dá)載體pCAMBIA1305.1－35S-8e，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化大豆，獲得轉(zhuǎn)基因發(fā)狀根。
　　 2．利用構(gòu)建好的載體轉(zhuǎn)化十個(gè)不同基因型大豆，均獲得發(fā)狀根，但轉(zhuǎn)化效率差異顯著，吉林小粒轉(zhuǎn)化效率最高。
　　 3．從十個(gè)基因型中選取四個(gè)差異不顯著的基因型，分別進(jìn)行光培養(yǎng)和暗培養(yǎng)，經(jīng)比較分析

4、發(fā)現(xiàn)兩種共培養(yǎng)方式，轉(zhuǎn)化效率均差異不顯著。
　　 4．從十個(gè)基因型中選取兩個(gè)基因型，分別選擇23℃、25℃、28℃進(jìn)行共培養(yǎng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，三個(gè)溫度條件下轉(zhuǎn)化效率差異不顯著。
　　 5．從十個(gè)基因型中選擇三個(gè)，分別在潮霉素濃度為10mg/L、12mg/L、14mg/L、16mg/L、18mg/L的梯度下進(jìn)行篩選，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，自貢冬豆和吉林小粒在10mg/L的時(shí)候陽性率最高，而中黃39在18mg/L時(shí)，陽性率最高，但總體差異性不