三種海洋多糖對巨噬細胞免疫調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、海帶(Laminaria japonica)和刺參(Stichopus japonicus)是有重要的食用和藥用價值的海洋資源，多糖是海帶和刺參中一類主要的生物活性成分。本課題以從海帶中提取的巖藻聚糖硫酸酯F1、F2及從刺參中提取的多糖HS為研究對象，以RAW264.7巨噬細胞為靶細胞，探索了F1、F2、HS對巨噬細胞的免疫調(diào)節(jié)機制，
　　主要研究內(nèi)容如下:
　　1、對巨噬細胞內(nèi)活性物質(zhì)的影響
　　采用MTT增殖實驗研

2、究了F1、F2、HS對細胞存活率的影響，結(jié)果表明:在166.7μg/ml時，F(xiàn)1、HS、F2對巨噬細胞增殖率的作用效果為:HS(31.9％)＞F2(23.1％)＞F1(20.7％)。采用吖啶橙熒光染色法檢測了F1、F2、HS對細胞中核酸代謝活性的影響，結(jié)果表明:在166.7μg/ml時，F(xiàn)1、HS、F2對巨噬細胞核酸熒光強度的增強效果為:HS(1.89)＞ F1(1.85)＞ F2(1.60)。采用溶菌酶活性檢測試劑盒檢測F1、F2、H

3、S對分泌性溶菌酶活性的影響，結(jié)果表明:在166.7μg/ml時，F(xiàn)1、HS、F2對巨噬細胞溶菌酶活性的增強效果為:HS(272.1 U/L)＞F1(267.7 U/L)＞F2(235 U/L)。采用中性紅法檢測了F1、F2、HS對細胞吞噬活性的影響，結(jié)果表明:在166.7μg/ml時，F(xiàn)1、HS、F2對巨噬細胞吞噬指數(shù)的作用效果為:HS(1.89)＞F1(1.85)＞ F2(1.60)。
　　2、對巨噬細胞分泌細胞因子的影響

4、>　　采用ELISA法檢測了F1、F2、HS對巨噬細胞分泌細胞因子的影響，實驗結(jié)果表明:在166.7μg/ml時，對巨噬細胞分泌IL-11β的增強效果為:HS(65.5 U/L)＞F1(59.1 U/L)＞ F2(56.4 U/L);對巨噬細胞分泌TNF-α的增強效果為:HS(351.4U/L)＞ F1(334.5 U/L)＞ F2(320.5 U/L);對巨噬細胞分泌IL-12的增強效果為:HS(21.6 U/L)＞F1(20.SU/

5、L)＞ F2(18.6 U/L);對巨噬細胞分泌IL-6的增強效果為:HS(64.7 U/L)＞F1(63.6U/L)＞ F2(60.3 U/L);對巨噬細胞分泌iNOS的增強效果為:HS(4.0 U/L)＞ F1(3.8 U/L)＞ F2(3.4 U/L)。
　　3、對巨噬細胞中細胞因子mRNA表達的影響
　　采用RT-PCR法研究了F1、F2、HS對巨噬細胞TNF-α mRNA及IL-6 mRNA表達的影響，實驗結(jié)果表明

6、:在166.7μg/ml時，對巨噬細胞TNF-α mRNA表達相對比例的增強效果為:HS(1.82)＞ F1(1.75)＞ F2(1.31)，與ELISA檢測結(jié)果一致;對巨噬細胞IL-6 mRNA表達相對比例的增強效果為:HS(2.1)＞F1(1.8)＞F2(1.7)，與ELISA檢測結(jié)果一致。
　　綜上所述，在166.7μg/ml，F(xiàn)1、HS、F2均可增強巨噬細胞的免疫調(diào)節(jié)活性，且增強效果為:HS＞ F1＞ F2。
　　雖

7、然在166.7μg/ml時，F(xiàn)2對巨噬細胞免疫調(diào)節(jié)活性的增強作用最小，但在500μg/ml時，F(xiàn)2對巨噬細胞的促增殖作用明顯高于F1及HS。雖然實際血藥濃度無法達到500μg/ml，但以上實驗結(jié)果為將F2繼續(xù)分離得到分子量更小但促增殖活性更高的多糖提供了可能。并為協(xié)同使用成本較低的幾種海帶巖藻聚糖硫酸酯后的免疫調(diào)節(jié)效果超過成本較高的刺參多糖提供了可能性。
　　本課題對比研究了海帶巖藻聚糖硫酸酯(F1、F2)和刺參多糖(HS)對巨噬