文昌魚promethin-like基因克隆和表達(dá)模式的研究.pdf

1、文昌魚是現(xiàn)存的與脊椎動物原始祖先最接近的頭索動物，一直被認(rèn)為是研究脊椎動物起源和進(jìn)化的模式動物。文昌魚的基因序列和表達(dá)模式已經(jīng)被廣泛用于不同物種之間的比較基因組學(xué)研究和發(fā)育同源性分析。本文從青島文昌魚(Branchiostoma belcheri tsingtaunese)腸cDNA文庫中，克隆了具有完整編碼框的胞質(zhì)蛋白promethin-like基因，并對其結(jié)構(gòu)、定位、進(jìn)化和表達(dá)進(jìn)行了研究，并首次嘗試其功能的探索。 首先，從青

2、島文昌魚消化道cDNA文庫中克隆了全長為1014bp的文昌魚promethin-like cDNA，最大開放閱讀框編碼167個氨基酸的蛋白質(zhì)，理論分子量為18 kDa，該cDNA編碼的蛋白還沒有明確的保守結(jié)構(gòu)域，這點與已報道的人和鼠的promethin相似。文昌魚promethin-like和哺乳動物、鳥類和兩棲類的promethin序列同源性相近(20-29％)，沒有明顯差異。通過構(gòu)建promethin蛋白家族系統(tǒng)進(jìn)化樹分析可知，青島

3、文昌魚位于脊椎動物基部，這與脊索動物是脊椎動物的祖先的觀點相一致。TMHMM Server v．2.0軟件分析結(jié)果顯示，文昌魚promethin-Like為跨膜蛋白，且與人、鼠、蛙等脊椎動物相同，都具有3個跨膜區(qū)域。上述分析表明，文昌魚promethin-like可能代表了脊椎動物promethin的原型，且約5.5億年前脊椎動物和無脊椎動物從共同祖先分化以后，包括人在內(nèi)的脊椎動物promethin變異不大。 其次，Northe

4、rn結(jié)果顯示，promethin-like在文昌魚肝盲囊、后腸、鰓、精巢、卵巢組織中的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為一條帶，大小為1014bp。切片原位雜交分析表明，promethin-like在成體文昌魚組織中呈特異性表達(dá)，在鰓、肝盲囊和后腸表達(dá)量較高，在卵巢、精巢、神經(jīng)管中的表達(dá)量較低，與Northern結(jié)果基本一致。切片原位雜交以及Northern結(jié)果也提示我們，文昌魚promethin-like和哺乳動物promethin組織表達(dá)相似，即可能在體內(nèi)