綠僵菌防治甘蔗螟蟲的初步研究.pdf

1、綠僵菌(Metarhizium ssp.)是一種廣譜性殺蟲真菌,可廣泛寄生8個(gè)目、30個(gè)科中的200余種昆蟲,也能寄生螨類和線蟲,經(jīng)過100多年的研究,目前在許多國(guó)家綠僵菌已作為重要的生物防治作用物,用于害蟲的防治。與傳統(tǒng)的化學(xué)農(nóng)藥相比,綠僵菌寄主范圍廣,致病力強(qiáng),具有對(duì)人、畜、農(nóng)作物無毒,無殘留,菌劑易生產(chǎn),持效期長(zhǎng),害蟲不產(chǎn)生抗藥性等優(yōu)點(diǎn),具有廣闊的應(yīng)用前景,而應(yīng)用綠僵菌防治甘蔗螟蟲是對(duì)螟蟲進(jìn)行生物防治的基本方法之一。本研究在分離篩

2、選出高產(chǎn)孢量、強(qiáng)耐熱性以及高毒力的綠僵菌菌株基礎(chǔ)上,經(jīng)大規(guī)模發(fā)酵后將其應(yīng)用于田間試驗(yàn),探索利用綠僵菌防治甘蔗螟蟲的有效途徑,主要研究結(jié)果如下:
　　 1.通過采集樣品進(jìn)行分離篩選,得到兩株新的綠僵菌菌株HS1和LY2。
　　 2.經(jīng)形態(tài)學(xué)分析和ITS分子鑒定,確認(rèn)這兩株菌株屬于金龜子綠僵菌小孢變種,且有可能分屬不同亞種。
　　 3.分析了綠僵菌菌株在3種不同培養(yǎng)基上培養(yǎng)時(shí)其產(chǎn)孢量的2個(gè)影響因素(初始接種濃度和相對(duì)

3、濕度),得出菌株在3種不同培養(yǎng)基上培養(yǎng)時(shí)須分別配以適宜的接種濃度和相對(duì)濕度,以獲取最大產(chǎn)孢量(燕麥培養(yǎng)基:1×107cfu/ml,65％;PPDA培養(yǎng)基:1×106cfu/ml,85％;玉米粉酵母浸膏培養(yǎng)基:1×108cfu/ml,75％)。另外,隨著繼代培養(yǎng)代數(shù)增加,菌株在這3種培養(yǎng)基上前五代的產(chǎn)孢量比較穩(wěn)定,第七代及之后的產(chǎn)孢量明顯下降。根據(jù)3種培養(yǎng)基功能方面的差別,在PPDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)菌株時(shí)要著重注意不同繼代培養(yǎng)代數(shù)對(duì)產(chǎn)孢量的影

4、響,其它2種培養(yǎng)基培養(yǎng)菌株一般不超過五代,產(chǎn)孢量相對(duì)比較穩(wěn)定。
　　 4.通過耐高溫菌株的誘導(dǎo)篩選,使綠僵菌孢子的耐熱性得到很大提高,同溫度下培養(yǎng)時(shí),經(jīng)過誘導(dǎo)的菌株產(chǎn)孢量明顯高于未經(jīng)誘導(dǎo)的菌株產(chǎn)孢量,而且經(jīng)過誘導(dǎo)的菌株的產(chǎn)孢量在34℃前隨溫度升高產(chǎn)孢量有所增加,35℃時(shí)產(chǎn)孢量開始顯著下降,所以該方法也可有效提高菌株在35℃前的產(chǎn)孢量。
　　 5.分析了菌株液固雙相發(fā)酵中液體發(fā)酵罐的轉(zhuǎn)速與通氣量對(duì)綠僵菌產(chǎn)孢量的影響,得出隨

5、發(fā)酵時(shí)間增加,通氣量與轉(zhuǎn)速應(yīng)設(shè)定為:0-24 h保持通氣流量為1.4 m3/h;24～48h保持通氣流量為1.6m3/h;48 h后保持通氣流量為1.8 m3/h,轉(zhuǎn)速始終維持在160r/min,此條件下菌株發(fā)酵的產(chǎn)孢量較高。
　　 6.對(duì)實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常用來進(jìn)行菌種保存的PPDA斜面保存法和20％甘油保存法所保存的菌株進(jìn)行萌發(fā)率測(cè)定,認(rèn)為PPDA斜面保存的菌株應(yīng)半年左右轉(zhuǎn)接一次,20％甘油保存的菌株也應(yīng)在一年左右轉(zhuǎn)接一次,避免菌株失

6、活。同時(shí)對(duì)發(fā)酵后孢子粉的兩種保存方式進(jìn)行萌發(fā)率測(cè)定,認(rèn)為發(fā)酵后應(yīng)將孢子粉冷凍干燥處理后再放入冰箱冷藏。另外,冷凍干燥法也可用于保存實(shí)驗(yàn)室菌株。
　　 7.在室內(nèi)用噴霧法測(cè)定了4株綠僵菌對(duì)甘蔗螟蟲3～4齡若蟲的致病力。結(jié)果表明,綠僵菌致病力強(qiáng)弱與菌株種類和接種劑量有密切關(guān)系。先接蟲后噴施菌劑時(shí),菌株對(duì)甘蔗螟蟲若蟲致病力的強(qiáng)弱順序?yàn)镴F813＞HS1＞MA4＞JF883;先噴施菌劑后接蟲時(shí),菌株對(duì)甘蔗螟蟲若蟲致病力的強(qiáng)弱順序?yàn)镸A4

7、＞HS1＞JF813＞JF883。在接種各菌株孢子濃度為1×108cfu·ml-1時(shí),菌劑對(duì)甘蔗螟蟲若蟲的致死率高。其中JF813菌株對(duì)甘蔗螟蟲若蟲具有很強(qiáng)的二次侵染能力,HS1菌株在兩種處理方式中致病力穩(wěn)定。
　　 8.在聯(lián)合毒力測(cè)定中三種化學(xué)殺蟲劑都對(duì)綠僵菌孢子萌發(fā)有一定抑制作用,濃度越大,毒性越強(qiáng),抑制作用明顯。三種化學(xué)殺蟲劑致死劑量的混配劑雖然殺蟲效果較好,但對(duì)綠僵菌孢子的抑制率很高,不利于綠僵菌發(fā)揮作用。而亞致死劑量呋

8、喃丹的抑制率明顯低于三種致死劑量的抑制率,另外從殺蟲效果看,亞致死劑量呋喃丹混配劑僅次于三種致死劑量混配劑,優(yōu)于其他處理,因此,綜合考慮后,選擇亞致死劑量呋哺丹與綠僵菌的混配劑為最佳處理。
　　 9.綜合分析小區(qū)試驗(yàn)的枯心率和產(chǎn)量情況,參考土壤宿存能力的監(jiān)測(cè)結(jié)果,選擇水劑JF813和水劑+甘蔗渣MA4為最佳處理進(jìn)行大田試驗(yàn)。分析大田試驗(yàn)枯心率和產(chǎn)量情況,結(jié)合不同處理的菌株土壤宿存情況和甘蔗螟蟲動(dòng)態(tài)的初步監(jiān)測(cè),驗(yàn)證了所使用的三種綠