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1、建立良好的稻瘟病菌的有性雜交體系和優(yōu)化培養(yǎng)條件是進(jìn)行無(wú)毒性遺傳分析的前提.該研究首先選用自然成熟的番茄榨汁和燕麥片作為培養(yǎng)基的主要組分,通過(guò)調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值在5.5左右并添加0.1﹪CaCO<,3>途徑優(yōu)化了稻瘟病菌有性世代形成的條件,顯著增加了稻瘟病菌子囊殼形成的數(shù)量和子囊孢子的成活率.觀察發(fā)現(xiàn),雖然不同雜交組合間有一定差異,分離稻瘟病菌子囊孢子的適宜時(shí)期,一般在子囊殼開(kāi)始出現(xiàn)后7~18天之間;在此期間分離出的子囊孢子成活率最高可達(dá)8
2、5.5﹪.此外,還建立了一種分離單子囊孢子的簡(jiǎn)便易行方法.該研究組建了稻瘟病菌的9個(gè)有性雜交組合,從中共分離出500多個(gè)子囊孢子菌株,分別測(cè)定了它們?cè)谙鄳?yīng)水稻品種梅雨明、石狩白毛和愛(ài)知旭上的無(wú)毒性分離情況.為了獲得與稻瘟病菌無(wú)毒基因AVR-Pii和AVR-Pia連鎖的分子標(biāo)記,從近500個(gè)隨機(jī)引物中篩選出2個(gè)引物OPI07和OPM10,可以擴(kuò)增出與無(wú)毒基因AVR-Pii連鎖的標(biāo)記,分別定名為OPI07<,700>和OPM10<,1314
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