幾丁質(zhì)酶(Chitinase)基因轉(zhuǎn)化小麥的研究.pdf

1、東北農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文幾丁質(zhì)酶(Chitinase)基因轉(zhuǎn)化小麥的研究姓名：劉偉華申請學位級別：碩士專業(yè)：作物載培學與耕作學指導教師：李文雄2000.5.1博士學位論文 A T O M ( C h i t i n a s c ) 基因轉(zhuǎn)化小麥的研究 東北農(nóng)業(yè)大學A B S T R A C TP 1 a s m i d D N A ，c o n t a i n i n g b e a nc h i t i n a s e g e n e

2、 ，w a sd e l i v e r e di n t os p r i n g w h e a tN E 7 7 4 2 ·，1 “ a p a r t j c l e b o m b a r d m e n t ，A g r o b a c t e r i u m t u # ] e f a r c I ' e D s , a n d p o l l e n t u b ep a t h w a y ．T h

3、ee x p r e s s i o na n di n h e r i t a n c eo ft r a n s g e n i cp l a n t sw e r ea n a l y z e d ，a n dt h ed i s e a s er e s i s t a n c eo ft h et r a n s f o r m e d p r o g e n yw a st e s t e d V i e w p o i n

4、 th a sb e e np u tf o r w a r do nt h ef a c t o r si n f l u e n c i n g g e n et r a n s f e r ：a l s ot h eq u e s t i o no c c u r r e di n t h e s t u d y o f t r a n s g e n i cw h e a t ．T h er e s u l tw a ss u

5、m m a r i z e d a s f o l l o w s ：1 T h eP l a s m i dD N Ac a r r y i n gb e a nc h i t i n a s eg e n e sw a s t r a n s f e r r e d i n t o8 1 3 9g e r m i n a l i n gi m m a t u r ee m b r y o sb yu s i n gP D S l 0

6、 0 0 ／H eh i g hv e l o c i t ym i c r op r o j e c t i l eb o m b a r d m e n t S e v e n t r a n s g e n i cp l a n t sd e r i v e df r o mN E 7 7 4 2T oh a v eb e e no b t a i n e da n dc o n f i r m e db yP C Ra n dP

7、 C R —S o u t h e r nh y b r i d i z a t i o n ．T h et r a n s g e n i cp l a n t sc a b l ef r o m4g r o u p si nd i f f e r e n tb o m b a r d p a r a m e t e rc o m b i n a t i o n ．T h et r a n s f e rf r e q u e n c

8、 yw a s0 ．5 6 ％．0 3 6 ％．0 ．2 0 9 6 ．a(chǎn) n d0 ．3 5 ％r e s p e c t i r e l y ．O n et h o u s a n da n df i v eh u n d r e df o r t y s i x N E 7 7 4 2 i m m a t u r e e m b r y o c a l l i w e r e t r e a t e d w i t h A g r

9、 o b a c t e r i u mt u m e f a c 2 e n s - m e d i a t em e t h o da n dm e t h o do fB i 0 1 i s t i cw o r k i n gi nc o m b i n a t i o nw i t hA g r o b a c t e r l u m t u m e f a c i e n s ．T h e t r a n s f e r r

10、 i n g f r e q u e n c y w a s 0 ．4 6 ％a n d 0 ．3 2 ％，r e s p e c t i v e l y ，b u tn or e g e n e r a t e dp l a n tw a so b t a i n e df r o mt r a n s g e n i cc a l l i ．T w ot r a n s g e n i cp l a n t sw e r eo b

11、t a i n e df r o m3 8 5N E 7 7 4 2f l o r e t sb yp o l l e nt u b ep a t h w a yo p e r a t i o n T h e t r a n s f e r r i n g f r e q u e n c y w a s 0 ．5 2 ％．T h e a u t h o r s u g g e s t s t h a td i f f e r e n t

12、w a ys h o u l db e t a k e nf r o me a c ho ft h et h r e et r a n s f e r r i n gm e t h o d su s e di nt h es t u d i e sa c c o r d i n g t ot h ep o t e n t i a lo fp l a n tr e g e n e r a t i o ni ng e n o t y p e

13、 su s e da sa c c e p t o r s B i o l i s t i ca n dA g r o b a c t e r i u mt 冊e f a c i e n si ss u i t a b l ef o rg e n o t y p e sw i t h h i g hf r e q u e n c yp o t e n t i a lo f p l a n tr e g e n e r a t i o n

14、 c u l t u r e di nv ] f r o , a n d p o l l e nt u b ep a t h w a yf o r t h o s e i n l o wf r e q u e n c y ．2 ．I m m a t u r ee m b r y ou s e da sa c c e p t o r i ng e n et r a n s f e ri sb e t t e rt h a nt h a t

15、o fy o u n g s p i k eb e c a u s eo fq u i c k l yc a l l u sf o r m a t i o na n d g o o d c a l l u sq u a l i t y ．T h ef r e q u e n c y o f p l a n t r e g e n e r a t i o n i n c a l l i f r o m i n m a t u r e e

16、m b r y o o f t h e t h r e eg e n o t y p e su s e d i nt h es t u d yw a sq u i t ed i f f e r e n t ．I t i s7 ．8 4 ％i nL i o —l O ．1 3 ．6 8 ％i n9 1 8 5 6 9 ，a n d5 4 ．8 8 ％i nN E 7 7 4 2 ．T h es t u d yi n d i c a t e