血常規(guī)血細(xì)胞分析儀、直方圖

1、血液檢查 海醫(yī)附院檢驗(yàn)科 潘 婉,第四篇 實(shí)驗(yàn)診斷,血常規(guī)檢查,即全血細(xì)胞分析，可以對感染、炎癥、手術(shù)后、血液系統(tǒng)疾病、肝脾病等進(jìn)行輔助診斷、監(jiān)測治療效果等。,,標(biāo)本采集與要求抗凝劑 ：EDTA-K2靜脈采血方法 ：4小時(shí)內(nèi)測定毛細(xì)血管采血方法 ：半小時(shí)內(nèi)測定手指血與靜脈血有差異，條件允許盡可能靜脈采血盡可能同一體位（血紅蛋白、血細(xì)胞比容、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)于站位時(shí)增加）

2、、一定時(shí)間和近似生理?xiàng)l件下采血,,血細(xì)胞分析儀檢測指標(biāo)與臨床應(yīng)用,血細(xì)胞分析儀,血細(xì)胞分析儀實(shí)質(zhì)上是指對一定體積內(nèi)血細(xì)胞數(shù)量及異質(zhì)性進(jìn)行分析的儀器，包括血細(xì)胞計(jì)數(shù)與分類、血紅蛋白測定及網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)等眾多分析項(xiàng)目，是臨床檢驗(yàn)工作中最常用的儀器。,40年代末，美國的庫爾特(W.H.Coulter)發(fā)明了電阻抗法粒子計(jì)數(shù)技術(shù)的設(shè)計(jì)專利。50年代初，第一臺血細(xì)胞分析儀(Coulter A型)應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)。當(dāng)時(shí)這種儀器為一個(gè)通道，僅能進(jìn)行紅

3、細(xì)胞、白細(xì)胞計(jì)數(shù)，故稱為血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀或血球計(jì)數(shù)儀。60年代，在原基礎(chǔ)上增加一個(gè)比色系統(tǒng)，可同時(shí)測定白細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白濃度、平均紅細(xì)胞體積和血細(xì)胞比容。70年代，開發(fā)了血小板計(jì)數(shù)，此時(shí)可做全血細(xì)胞計(jì)數(shù)。,70年代末80年代中，根據(jù)白細(xì)胞大小不同而產(chǎn)生的阻抗值或散射量的不同，已能對細(xì)胞進(jìn)行分類(兩分群、三分群或五分類)，且一次可報(bào)告13～14個(gè)分析參數(shù)及紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)三個(gè)直方圖。80年代末，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)

4、，開發(fā)了網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)儀。90年代初，網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測技術(shù)應(yīng)用到血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀上。90年代中期研制出的多功能、多參數(shù)、多分類全自動血細(xì)胞分析儀及檢測的全自動化，把臨床血液學(xué)檢驗(yàn)提高到了一個(gè)全新的水平。,按自動化程度可分為半自動血細(xì)胞分析儀和全自動血細(xì)胞分析儀。 半自動血細(xì)胞分析儀需在主機(jī)外匹配稀釋器，采集的血標(biāo)本經(jīng)稀釋器預(yù)稀釋后再上機(jī)檢測。這類儀器工作效率低，吸樣準(zhǔn)確性差，多為手工加溶血素、混勻等，其加入量及放置時(shí)間、因人

5、為因素，隨機(jī)誤差較大，不利于質(zhì)控，并且易發(fā)生“半堵孔”或“堵孔”現(xiàn)象。90年代以來，在發(fā)達(dá)國家已被逐步淘汰，國內(nèi)用戶也為數(shù)不多，趨于淘汰。,1.血細(xì)胞分析儀分型,全自動血細(xì)胞分析儀運(yùn)用了較先進(jìn)的計(jì)算機(jī)技術(shù)和機(jī)械系統(tǒng)，菜單式操作程序，條碼閱讀，自動吸取樣品，血液在機(jī)器內(nèi)部自動稀釋，效率高，檢測量準(zhǔn)確，有利于質(zhì)控，減少了操作者實(shí)驗(yàn)室感染的幾率。且大部分采用表面活性劑法測血紅蛋白，避免了氰化物對環(huán)境的污染，是全面取代半自動血細(xì)胞分析儀的必然趨

6、勢。目前還有將全自動血細(xì)胞分析儀與自動涂片染色機(jī)、電腦及應(yīng)用軟件組合而成的血液分析工作站，將多臺全自動血細(xì)胞分析儀、全自動網(wǎng)織紅細(xì)胞分析儀、自動涂片染色機(jī)、機(jī)械連接系統(tǒng)、電腦、高性能應(yīng)用軟件組合為一體的血液分析流水線（如HST-330模塊式全自動血液分析流水線）等。,按檢測原理⑴電容型：通過改變兩電極之間電容量，獲得脈沖信號進(jìn)行計(jì)數(shù)。⑵光電型：利用細(xì)胞和稀釋液對光的吸收度不同，使光敏元件在細(xì)胞通過時(shí)產(chǎn)生脈沖信號而計(jì)數(shù)。⑶激光型：細(xì)

7、胞受到激光的照射產(chǎn)生光吸收、光散射、發(fā)射熒光，得到光學(xué)的、電子的信號進(jìn)行計(jì)數(shù)。⑷電阻抗型：利用血細(xì)胞的電阻大于電解質(zhì)溶液(稀釋液)的電阻，細(xì)胞通過微孔時(shí)兩電極之間的阻抗值增大，產(chǎn)生電壓脈沖信號而進(jìn)行血細(xì)胞計(jì)數(shù)和體積測定。國內(nèi)產(chǎn)品均為電阻抗型。⑸聯(lián)合檢測型：采用多種現(xiàn)代高科技技術(shù)，如利用電阻抗、激光、高頻電磁波、流式細(xì)胞術(shù)和化學(xué)染色、特殊溶血?jiǎng)┑榷喾轿宦?lián)合檢測同一個(gè)血細(xì)胞。此類儀器功能多，特異性強(qiáng)、速度快、獲得參數(shù)多、對環(huán)境污染小。,

8、2.電阻抗法血細(xì)胞分析儀,血細(xì)胞與等滲電解質(zhì)溶液相比為相對的不良導(dǎo)體，其電阻值大于稀釋液的電阻值。當(dāng)血細(xì)胞通過檢測器小孔管微孔的孔徑感受區(qū)時(shí)，檢測器內(nèi)外電極之間的恒流源電路上電阻值瞬間增大，造成兩極之間電壓的變化，產(chǎn)生一個(gè)電壓脈沖信號。每次檢測中產(chǎn)生的脈沖信號數(shù)，即相當(dāng)于檢測出的細(xì)胞數(shù)。,操作時(shí)，位于小孔兩側(cè)的電極產(chǎn)生恒定電流。根據(jù)歐姆定律電壓變化與電阻變化成正比，電阻值又同細(xì)胞體積成正比，血細(xì)胞體積越大，電壓越高，在甄別器上的脈沖幅度

9、就越大，各種大小不同細(xì)胞產(chǎn)生的脈沖信號分別送入儀器內(nèi)電腦的各個(gè)通道，經(jīng)運(yùn)算得出各種細(xì)胞參數(shù)。目前，多數(shù)儀器在給出細(xì)胞數(shù)據(jù)結(jié)果的同時(shí)還提供細(xì)胞群體大小分布情況圖形，稱之為細(xì)胞體積直方圖。,血細(xì)胞分析儀在進(jìn)行細(xì)胞分析時(shí)，將每個(gè)細(xì)胞的脈沖根據(jù)其體積大小分配并存儲在相應(yīng)的體積通道中，每個(gè)通道收集的數(shù)據(jù)被統(tǒng)計(jì)出相對數(shù)，表示在Y軸上，體積數(shù)據(jù)以飛升(fl)為單位，表示在X軸上?？蓪准?xì)胞體積從30～450fl分為256個(gè)通道，每個(gè)通道1.64fl，

10、依據(jù)體積大小分別將其放在不同的通道中，得到白細(xì)胞體積分布直方圖。初步確認(rèn)：第一群是小細(xì)胞區(qū)，主要是淋巴細(xì)胞，體積在35～90fl之間；第二群是中間細(xì)胞群，主要是單核細(xì)胞，體積在90～160fl，；第三群為大細(xì)胞區(qū)，主要是中性粒細(xì)胞，它分葉多，顆粒多，體積可大至160fl以上。,中間細(xì)胞,血小板和紅細(xì)胞共用一個(gè)小孔管。正常人紅細(xì)胞體積和血小板體積有明顯的界限。因此血小板計(jì)數(shù)準(zhǔn)確容易。當(dāng)血細(xì)胞懸液中含有異常血細(xì)胞（如小紅細(xì)胞）時(shí)，劃分界限不

11、清。為使血小板計(jì)數(shù)有較高的準(zhǔn)確性，計(jì)算機(jī)對血小板和紅細(xì)胞分布圖進(jìn)行判斷，將血小板計(jì)數(shù)的上限閾值判定線放在紅細(xì)胞和血小板分布圖交叉部分的最低處計(jì)數(shù) 。,,,,各項(xiàng)紅細(xì)胞指數(shù)的檢測原理:根據(jù)儀器檢測的RBC、HCT和Hb的數(shù)據(jù)，經(jīng)儀器內(nèi)存程序換算出紅細(xì)胞平均體積(MCV)、紅細(xì)胞平均血紅蛋白的含量(MCH)和紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度(MCHC)。紅細(xì)胞體積分布寬度(RDW)由血細(xì)胞分析儀在檢測紅細(xì)胞數(shù)量的過程中 ,同時(shí)測量紅細(xì)胞體積大小的

12、差異獲得，是反映外周血紅細(xì)胞體積異質(zhì)性的參數(shù)。RDW能直接、客觀、及時(shí)地反映紅細(xì)胞大小不等的程度，對貧血的診斷有重要意義。,,血紅蛋白測定原理:在稀釋的血液中加入溶血?jiǎng)┖蠹t細(xì)胞被溶解，釋放出血紅蛋白(Hb)，后者與溶血?jiǎng)┲杏嘘P(guān)成分結(jié)合形成Hb衍生物，進(jìn)入Hb測試系統(tǒng)，在特定波長(一般在530～550nm)下比色，吸光度的變化與液體中H含量成正比，儀器便可顯示其濃度。,3.血細(xì)胞直方圖的臨床應(yīng)用,直方圖是血細(xì)胞分析儀用電阻抗原理對血細(xì)胞進(jìn)