土壤微生物的分離鑒定

1、土壤微生物的分離鑒定土壤微生物的分離鑒定實驗報告實驗報告09級生科一班（周一下午組）級生科一班（周一下午組）安明玉安明玉同組者：陳汶燦、程彬、陳肖然、高琳璐、秦瑤同組者：陳汶燦、程彬、陳肖然、高琳璐、秦瑤利用單一染料對菌體進行染色稱為簡單染色。通常用堿性染料進行簡單染色，原因在于微生物細胞在堿性、中性、弱酸性溶液中通常帶負電荷，而染料電離后染色部分帶正電荷，很容易與細胞結合壁著色；當細胞處于酸性條件下（如細胞分解糖類產(chǎn)物）所帶正電荷增加

2、時，可采用酸性染料染色。革蘭氏染色，革蘭氏染色法是復（特殊）染色法中一種最重要的鑒別性染色法之一。該染色法是先將細菌用結晶紫染色，再加媒染劑碘液媒染以增加染料和細菌細胞的親和力，使它和結晶紫在菌體細胞壁部位形成分子量較大的紫碘復合物，而后用脫色劑酒精或丙酮脫色，最后再用復染劑番紅復雜。如果細菌經(jīng)脫色劑酒精或丙酮處理后不被脫色而保存初染顏色即紫色，即為“革蘭氏陽性菌”；若初染被脫色而染上復染劑番紅顏色即淡紅色，則為“革蘭氏陰性菌”。革蘭氏

3、陽性菌的肽聚糖層厚而致密，經(jīng)過媒染和染色后顏色不易被洗掉，而呈現(xiàn)紫色；而陰性菌肽聚糖層僅12層，層薄而疏，與染色劑結合不緊密，顏色容易被洗掉而被番紅復復染成紅色。革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟，但在具體操作方法上有多種做法。3.菌株鑒定的生理生化實驗（1）糖發(fā)酵與氧化試驗在細菌的分類鑒定中，糖類發(fā)酵與氧化測定是一項重要依據(jù)。特別是對細菌的鑒定尤為重要。常用的發(fā)酵與氧化的糖類包括單糖，雙糖，多糖三類：如葡萄糖，蔗糖，

4、淀粉等。醇類包括五元醇，六元醇如到金盞花醇，甘露醇等；糖苷類主要包括有水楊苷等。絕大多數(shù)細菌都能利用糖類作為能源和碳源，但由于不同的菌類存在酶類差異，已而對糖類發(fā)酵與氧化的能力就有所不同。有的能利用這種而不能利用那種，有的正好相反；有的在糖類發(fā)酵與氧化代謝中能分解糖類，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，有的則只能產(chǎn)酸不能產(chǎn)氣。酸產(chǎn)生與否，以及時發(fā)酵類型產(chǎn)酸還是氧化類型產(chǎn)酸，可以由預先加在培養(yǎng)基中的指示劑（溴百里酚藍水溶液）呈現(xiàn)出來。這樣把接好菌種的培養(yǎng)基放在厭

5、氧或好樣的條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)基由綠色變?yōu)辄S色為產(chǎn)酸，是否產(chǎn)氣是通過觀察培養(yǎng)基中是否產(chǎn)生氣泡或培養(yǎng)基斷裂來測定，如產(chǎn)生斷裂或有氣泡證明由氣體存在。（2）過氧化氫酶測定乳酸菌和許多厭氧菌與其他細菌區(qū)分的主要依據(jù)是測定有無過氧化氫酶。過氧化氫酶又稱接觸酶，它能把過氧化氫分解為水和氧氣，氧分子變做氣泡跑出來，則為過氧化氫酶陽性。乳酸菌和許多厭氧菌在過氧化氫試驗中呈陰性。（3）細胞色素氧化酶測定細胞色素氧化酶是氧化酶中的一種，有時人們習慣的把細胞色

6、素氧化酶稱為氧化酶，所以在細菌分類鑒定中所說的氧化酶就是指細胞色素氧化酶。細胞色素氧化酶在右分子氧和細胞色素C存在時，可氧化二甲基對本撐二胺(氨基二甲基苯胺)，使之呈現(xiàn)玫瑰紅到暗紅色，在此基礎上，還能和a苯酚結合生成吲哚酚藍，而出現(xiàn)藍色。四、實驗試劑與器材四、實驗試劑與器材1.器材培養(yǎng)皿、載玻片、蓋玻片、普通光學顯微鏡、量筒、滴管、吸水紙、燒杯、三角瓶、電爐、玻璃棒、接種環(huán)、鑷子、恒溫培養(yǎng)箱、高溫滅菌鍋、電子天平、濾紙、pH試紙等。2.