葡萄籽原花青素對大鼠酒精性肝損傷的預(yù)防作用

1、葡萄籽原花青素對大鼠酒精性肝損傷的預(yù)防作用,,目錄,,研究背景,,研究工作進(jìn)度的初步安排,研究背景,原花青素：是一類由黃烷-3-醇縮合而成的聚多酚類物質(zhì),具有抑制脂質(zhì)過氧化、抗癌、抗過敏、抗突變、抗衰老等生物活性。葡萄籽原花青素：是從葡萄籽中提取的原花青素低聚物，迄今為止源于植物的最高效的抗氧化劑之一。酒精性肝損傷：是由于長期飲酒而導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)促氧化物質(zhì)產(chǎn)生明顯增多和抗氧化物質(zhì)的減少，使肝臟代謝障礙，最終致肝細(xì)胞壞死或凋亡的疾病。,

2、研究目的及意義,,意義研究葡萄籽原花青素對酒精性肝損傷的預(yù)防作用，從而為臨床預(yù)防酒精性肝損傷探索一種新的有效方法。,,目的研究葡萄籽原花青素對酒精性肝損傷的預(yù)防作用及其作用機(jī)制。,,,,葡萄籽原花青素對酒精性肝損傷的預(yù)防作用,研究現(xiàn)狀分析—葡萄籽原花青素,,,,,,,,,,,,,,,,,葡萄籽原花青素,抗糖尿病,抗心血管疾病,抗腫瘤,其他作用,抗傷害和鎮(zhèn)痛,預(yù)防牙周病,葡萄籽原花青素研究進(jìn)展----清除自由基、抗氧化活性作用,GS

3、PE 含有大量的活性酚羥基，是氫的供體，能有效的清除多種活性氧自由基，具有極強(qiáng)的抗氧化活性。GSPE 可明顯降低大鼠肝、腦組織自發(fā)性丙二醛(MDA)的生成，并對CCl4、H2O2和鐵離子—抗壞血酸等自由基引發(fā)劑誘導(dǎo)的肝脂質(zhì)過氧化具有明顯的拮抗作用， 可減輕肝組織GSH 耗竭，具有明顯的抗脂質(zhì)過氧化作用與清除自由基的效應(yīng)。GSPE 能有效地清除O2·－、·OH、H2O2、ONOO－和全血嗜中性白細(xì)胞“呼吸爆發(fā)”

4、產(chǎn)生的多種活性氧，有效地抑制脂質(zhì)過氧化,研究現(xiàn)狀分析—酒精性肝損傷（如酒精性脂肪肝）,,酒精性肝損傷,,發(fā)病機(jī)制,防治與治療,,,1 酒精及其代謝物對肝細(xì)胞的毒性 作用2 氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化作用3 內(nèi)毒素、細(xì)胞因子及炎癥介質(zhì)在 酒精性肝損傷中的作用,1 戒酒2 營養(yǎng)治療：蛋白質(zhì)、鋅3 藥物治療：糖皮質(zhì)激素、己酮可 可堿、秋水仙堿、磷脂肽膽堿4 其它,,,酒精性肝病研究進(jìn)展----自由基損害作用,抗生素可通過

5、抑制腸道LPS的產(chǎn)生顯著減輕慢性乙醇接觸引起的小鼠肝臟組織脂質(zhì)過氧化。乙醇在代謝過程中可直接誘導(dǎo)P- 450 2E1的活性, 產(chǎn)生大量自由基和ROS。自由基除直接損傷肝細(xì)胞外, 還可以通過增加肝細(xì)胞對脂質(zhì)過氧化的敏感性, 引起肝細(xì)胞損傷。,酒精性肝病研究進(jìn)展----有效治療藥物及途徑,白芍總甙對大鼠酒精性肝損傷保護(hù)作用,其機(jī)制可能與降低脂質(zhì)過氧化水平,提高抗氧化酶活性,抑制NF-κB的活化有關(guān)。參照文獻(xiàn)報道方法(李蓮.白芍總甙對

6、大鼠酒精性肝損傷保護(hù)作用的實驗研究[J].湖北職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報2010,1；105-109) 三七對小鼠急性酒精性肝損傷保護(hù)作用,三七具有清除自由基、抑制脂質(zhì)過氧化的作用,對急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用可能與升高肝臟SOD、GSH-PX活性及降低MDA含量有關(guān)。參照文獻(xiàn)報道方法(劉同剛; 沙凱輝; 王邦茂.三七對小鼠急性酒精性肝損傷保護(hù)作用的實驗研究[J].山東醫(yī)藥，2010,16；44-45),研究項目創(chuàng)新性,,,,,經(jīng)文獻(xiàn)檢索，發(fā)現(xiàn)

7、已有葡萄籽原花青素在肝臟缺血-再灌注損傷中起保護(hù)作用，但尚未見葡萄籽原花青素預(yù)防酒精性肝損傷相關(guān)文獻(xiàn)報道。故研究內(nèi)容具有創(chuàng)新性。,研究項目技術(shù)路線,C組（慢性酒精中毒+葡萄籽原花青素）,B組（慢性酒精中毒+生理鹽水）,成年大白鼠30只，雌雄各半隨機(jī)分組，每組雌雄數(shù)均等,A組（生理鹽水）,,,,10周后檢查肝臟大體及組織學(xué)變，肝組織脂質(zhì)過氧化指標(biāo)丙二醛（MDA）。檢查血清谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）變化。,,,,比較

8、A組合B組結(jié)果，闡明慢性酒精中毒是否引起肝損傷,比較B組和C組，闡明葡萄籽原花青素是否可以預(yù)防慢性酒精中毒引起肝損傷,總結(jié)，撰寫論文,,,,,主要實驗方法,酒精性肝損傷動物模型：第一組的的大鼠灌胃給予生理鹽水（15ml.kg-1.d-1, 每3d增加2.5ml.kg-1.d-1至25ml.kg-1.d-1），之后保持此量灌胃,作為空白對照組；第二組第三組大鼠灌胃給予酒脂混合（3:2）乳液（劑量15ml.kg-1.d-1，每3d增加2

9、.5ml.kg-1.d-1至25ml.kg-1.d-1之后保持此量灌胃)，連續(xù)10周，復(fù)制慢性酒精中毒模型。參照文獻(xiàn)報道方法(扈國杰, 李佃貴.酒精性脂肪肝大鼠模型的建立及新清肝飲煎劑的防治作用[J].中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報2004 ，3；123-125),主要實驗方法,預(yù)防酒精性脂肪肝：第一組第二組灌胃給予生理鹽水200 mg?kg-1?d-1平均分兩次，第三組灌胃給予葡萄籽原花青素200 mg?kg-1?d-1（使用時用生理鹽水配成1%的濃

10、度）平均分兩次灌胃，連續(xù)10周。(葡萄籽原花青素有效劑量參照文獻(xiàn):張琳，買買提祖農(nóng).買蘇爾. 葡萄籽原花青素對大鼠肝缺血再灌注損傷的抗氧化作用研究[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2010，02),肝臟組織學(xué)檢查用HE染色，計算肝組織中脂肪細(xì)胞占總細(xì)胞百分率。肝組織丙二醛(MDA)測定采用丙二醛測試盒(TBA法)方法.谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)測定采用試劑盒，北京利德曼生化技術(shù)有限公司生產(chǎn)。谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)的含量測定采用試劑盒(丙酮酸氧化酶

11、法)，上海百祥生物科技有限公司提供。 統(tǒng)計學(xué)處理：數(shù)據(jù)表示為均數(shù)?標(biāo)準(zhǔn)誤（X?SD），采用方差分析檢驗，p<0.05為有顯著性差異。,主要實驗方法,研究可行性分析,,,,條件可行性,本項目主要檢查肝臟大體及組織學(xué)變，肝組織脂質(zhì)過氧化指標(biāo)丙二醛(MDA)。 檢查血清谷草轉(zhuǎn)氨 酶(AST)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)變化，技術(shù)難度適中，在老師指導(dǎo)下可以完成實驗。,葡萄籽原花青素具有抑制脂質(zhì)過氧化的作用，而酒精性肝病致病原因之一是由于脂質(zhì)

12、過氧化化作用，本項目探究葡萄籽原花青素對酒精性肝損傷的預(yù)防作用，在理論上是可行的。,機(jī)能學(xué)實驗將提供本項目的實驗平臺，該實驗室具備本項目所需的實驗儀器、器械、藥品及飼養(yǎng)實驗動物等條件。,預(yù)期結(jié)果,葡萄籽原花青素對酒精性肝損傷具有預(yù)防作用，其作用機(jī)制與抗肝組織脂質(zhì)過氧化有關(guān)。,研究工作進(jìn)度的初步安排,2011.06.15~2011.07.15 物品的購買 大鼠30只 合計

13、1800元 （北京華阜康生物科技服務(wù)有限公司） 葡萄籽原花青素一瓶 合計200元 （上海森一化工有限公司） 大鼠飼料 100元 負(fù)責(zé)人:王萌、李亞偉、魏婕、馬藝萍2011.07.15~2011.09.16 大鼠酒精性肝損傷模型 的制備

14、 負(fù)責(zé)人：王萌 李亞偉 魏婕 馬藝萍,研究工作進(jìn)度的初步安排,2011.09.17~2011.09.18 處死大鼠提取血液，測定AST和ALT的含量，解剖大鼠，觀察肝臟大體，制備肝組織玻片 負(fù)責(zé)人：王萌 李亞偉 魏婕 馬藝萍2011.09.19