水產(chǎn)品中己烷雌酚_己烯雌酚與雙烯雌酚殘留的毛細(xì)管電泳測(cè)定

1、第29卷第1期2010年1月分析測(cè)試學(xué)報(bào)FENXICESHIXUEBAO(JournalofInstrumentalAnalysis)Vol129No1155～58收稿日期:20091009修回日期:20091125基金項(xiàng)目:中國(guó)博士后基金資助項(xiàng)目(20070420688)福州大學(xué)科研啟動(dòng)基金資助項(xiàng)目(0460022233)第一作者:林子俺(1977)男福建福州人講師博士Tel:059187893175Email:zalin@fzu1e

2、du1cn水產(chǎn)品中己烷雌酚、己烯雌酚與雙烯雌酚殘留的毛細(xì)管電泳測(cè)定林子俺龐紀(jì)磊黃慧鄭江南張?zhí)m(福州大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院食品安全分析與檢測(cè)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室福建福州350002)摘要:建立了毛細(xì)管電泳紫外檢測(cè)法測(cè)定水產(chǎn)品中己烷雌酚(HXS)、己烯雌酚(DES)及雙烯雌酚(DIES)殘留的新方法。研究了緩沖體系的酸度、濃度、添加劑、分離電壓、進(jìn)樣時(shí)間及溫度等對(duì)組分分離的影響。在檢測(cè)波長(zhǎng)為200nm分離電壓為20kV運(yùn)行緩沖液為50mmolL硼砂2

3、5mmolL氫氧化納(pH1213含30%的NN2二甲基甲酰胺)的條件下3種目標(biāo)組分在14min內(nèi)達(dá)到基線分離。HXS、DES與DIES的質(zhì)量濃度與峰面積分別在210～120、110～100、110～100mgL范圍內(nèi)呈良好線性相關(guān)系數(shù)(r2)分別為019998、019992、019994檢出限為013～019mgL。將該方法用于鯽魚(yú)中3種雌酚類激素的檢測(cè)結(jié)果令人滿意。關(guān)鍵詞:毛細(xì)管電泳水產(chǎn)品己烷雌酚己烯雌酚雙烯雌酚中圖分類號(hào):O657

4、18R97711文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):10044957(2010)01005504doi:1013969j1issn110044957120101011013DeterminationofHexestrolDiethylstibestrolDienestrolResiduesinAquaticProductbyCapillaryElectrophesisLINZi2anPANGJi2leiHUANGHuiZHENGJiang2nanZ

5、HANGLan(KeyLabatyofAnalysisDetectionfFoodSafetyMinistryofEducationDepartmentofChemistryFuzhouUniversityFuzhou350002China)Abstract:Afacilemethodwasdevelopedfsimultaneousdeterminationofhexestrol(HXS)dieth2ylstibestrol(DES)

6、dienestrol(DIES)residuesinaquaticproductbasedoncapillaryelectrophe2siscoupledwithultravioletdetection.Theinfluencesofsomeimptantfactssuchasadditiveacidityconcentrationofrunningbufferseparationvoltageinjectiontimetemperat

7、ureweresystemicallyinvestigated.Atthedetectionwavelengthof200nmagoodbaselineseparationofthreeanalyteswasobtainedwithin14minbyusing50mmolLbax25mmolLNaOH(pH1213)withadditiveof30%(byvolume)DMFasrunningbuffer20kVasanappliedv

8、oltage.Thecalibra2tioncurveswerelinearintherangeof210120mgLfHXS110100mgLfDESDIESwithcrelationcoefficientsof019998019992019994respectively.Thelimitsofdetection(SN=3)ofHXSDESDIESwere019014013mgLrespectively.Theav2eragereco

9、veriesfromsamplesatspikedconcentrationlevelof50mgLwererangedfrom92%to98%withRSDsof213%319%.Themethodshowedagoodrepeatabilityhighsensitivitywasappliedinthedeterminationofthreeanalytesinrealsamplewithsatisfactyresult.Keywo

10、rds:capillaryelectrophesisaquaticproducthexestroldiethylstibestroldienestrol激素是一類具有調(diào)節(jié)生物機(jī)體代謝、生長(zhǎng)、發(fā)育、生殖等作用的化學(xué)物質(zhì)。己烷雌酚(HXS)、己烯雌酚(DES)、雙烯雌酚(DIES)是常見(jiàn)的人工合成雌激素(分子結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1)由于其結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、易于合成、成本低等特點(diǎn)近年來(lái)逐漸在飼料工業(yè)得到廣泛應(yīng)用。雌酚類激素對(duì)水生動(dòng)物的正常合成代謝有刺激作用可促

11、使動(dòng)物體內(nèi)氮停留增加導(dǎo)致氨基酸合成蛋白質(zhì)的速度加快而增重[1]。水產(chǎn)品中殘留的激素進(jìn)入人體后蓄積到一定程度會(huì)破壞機(jī)體的正常生理平衡[2]。對(duì)于這類激素歐盟現(xiàn)已禁止使用美國(guó)和加拿大則限量使用。我國(guó)規(guī)定動(dòng)物組織中不得檢出DES但對(duì)HXS和DIES殘留的測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)尚待制定[3]。第1期林子俺等:水產(chǎn)品中己烷雌酚、己烯雌酚與雙烯雌酚殘留的毛細(xì)管電泳測(cè)定50mmolLpH1210硼砂氫氧化鈉體系為運(yùn)行緩沖液考察了不同的緩沖體系對(duì)電滲流和分離效果的影

12、響。結(jié)果表明只有在堿性緩沖體系下(如硼酸鹽體系和硼砂氫氧化鈉體系)才能觀察到3種雌酚的電泳峰且在硼砂氫氧化鈉體系下3種雌酚的電泳峰尖銳、峰形對(duì)稱。所以選擇硼砂氫氧化鈉為運(yùn)行緩沖液。21113緩沖液酸度的影響雌酚類物質(zhì)由于2個(gè)苯環(huán)上各有1個(gè)羥基在堿性條件下極易電離形成帶負(fù)電荷的離子有利于減緩遷移速率以達(dá)到分離。根據(jù)此原理配制pH913～1315的硼砂氫氧化鈉緩沖液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明隨著pH的升高毛細(xì)管內(nèi)層表面的負(fù)電荷增加電滲流加大遷移時(shí)間

13、相應(yīng)縮短但分離效果不顯著當(dāng)pH大于1010時(shí)被測(cè)組分的遷移時(shí)間逐漸增長(zhǎng)(可能是由于此時(shí)因被電離而帶負(fù)電荷的組分對(duì)遷移速率的影響大于電滲流對(duì)遷移速率的影響)分離趨勢(shì)明顯。綜合考慮毛細(xì)管對(duì)酸堿的適用范圍選擇pH值為1213。21114緩沖液濃度的影響以pH1213的硼砂氫氧化鈉(濃度比2∶1)為緩沖液考察硼砂濃度分別為5、10、20、25、50、75mmolL時(shí)對(duì)遷移時(shí)間的影響。結(jié)果表明硼砂濃度為5～50mmolL時(shí)HXS能與另2種組分達(dá)到

14、基線分離但DES和DIES無(wú)法實(shí)現(xiàn)基線分離。隨著濃度增大3組分分離效果沒(méi)有明顯改善且遷移時(shí)間延長(zhǎng)焦耳熱現(xiàn)象明顯。所以選擇50mmolL硼砂25mmolL氫氧化鈉為最佳濃度。21115DMF體積分?jǐn)?shù)的影響實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)采用區(qū)帶毛細(xì)管電泳很難將DES和DIES同時(shí)分離主要是由于二者荷質(zhì)比極為相似因此其表觀遷移速率相近。適當(dāng)引入一些添加劑有利于改善分離效果。實(shí)驗(yàn)對(duì)比了十二烷基硫酸鈉(SDS)、十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)、環(huán)糊精、吐溫280、曲

15、拉通X2100、二甲亞砜、DMF等添加劑的效果結(jié)果表明吐溫280和DMF對(duì)DES和DIES具有分離能力。但對(duì)于吐溫280隨著其濃度的增大3組分的色譜峰高降低對(duì)方法的檢出限和穩(wěn)定性不利而DMF體積分?jǐn)?shù)的變化則對(duì)3組分的峰高沒(méi)有影響。實(shí)驗(yàn)表明當(dāng)DMF的體積分?jǐn)?shù)大于30%時(shí)3組分能夠完全基線分離。隨著體積分?jǐn)?shù)不斷增大遷移時(shí)間相應(yīng)增長(zhǎng)為縮短分析時(shí)間選定DMF體積分?jǐn)?shù)為30%。21116分離電壓、進(jìn)樣時(shí)間與溫度的選擇考察了分離電壓對(duì)被測(cè)物遷移時(shí)間

16、的影響提高分離電壓可以縮短組分的遷移時(shí)間但由于受到儀器限制以及考慮焦耳熱的影響選擇分離電壓為20kV。選擇進(jìn)樣時(shí)間為3、5、8、10、12、15s考察進(jìn)樣時(shí)間和組分峰高間的關(guān)系。結(jié)果表明進(jìn)樣5s后組分峰高增加不明顯且進(jìn)樣時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)對(duì)組分的分離產(chǎn)生負(fù)面影響所以實(shí)驗(yàn)選擇進(jìn)樣5s?？疾炝?5、20、25、30℃時(shí)的遷移時(shí)間和組分峰高的變化。溫度過(guò)低或過(guò)高均會(huì)發(fā)生基線漂移所以選擇實(shí)驗(yàn)溫度為25℃。圖2標(biāo)準(zhǔn)品的毛細(xì)管電泳圖Fig12Electro

17、pherogramofstardmixtureEOF:electroosmoticflow1.HXS2.DES3.DIES在上述優(yōu)化條件下HXS、DES、DIES(質(zhì)量濃度均為5010mgL)在14min內(nèi)得到基線分離(見(jiàn)圖2)。212方法的重復(fù)性、線性范圍及檢出限在優(yōu)化條件下將50mgL的HXS、DES、DIES標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣5次遷移時(shí)間和峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為015%～017%、016%～018%重復(fù)性良好。配制不同

18、質(zhì)量濃度的HXS、DES、DIES的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液在優(yōu)化條件下考察其線性范圍和檢出限結(jié)果見(jiàn)表1。HXS、DES和DIES的電泳峰面積與質(zhì)量濃度約在2個(gè)數(shù)量級(jí)范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系檢出限(SN=3)為013～019mgL相關(guān)系數(shù)r2為019992～019998。表1方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性范圍、檢出限及加標(biāo)回收率Table1Calibrationcurvelinearrangedetectionlimitspikedrecoveryofthem

19、ethod(n=5)CompoundRegressionequation3r2Linearrangeρ(mgL1)Detectionlimitρ(mgL1)AddedρA(mgL1)FoundρF(mgL1)RecoveryR%RSDsr%HXSY=011663X014593019998210～1200195010451892319DESY=015683X113945019992110～1000145010481898213DIESY=