leptinmrna在早孕絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞中的表達(dá)

1、 第 2 7 卷第 5 期 4 4 82 0 0 5 年 3 月第 三 軍 醫(yī) 大 學(xué) 學(xué) 報 A C T AA CA DE MI AEME D I C I N AEMI L I T AR I ST E R T I AEV o 1 ．2 7 ．N o．5Ma r ．2 0 o 5L e p t i nm R N A在早孕絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞中的表達(dá) 文章編號： 1 0 0 0 - 5 4 0 4 ( 2 0 0 5 ) 0 5 4 ) 4 4

2、8 ~ 3 3蔣立艷 ， 李真 ， 成 婭 ， 陳波潔， 鐘序素 ， 林桂 蘭， 楊桂芬 ( 第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院婦產(chǎn)科， 重慶 4 0 0 0 3 7 )提 要： 目的 測定早孕絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞中l(wèi) enm R N A表達(dá)， 探討 l e p t i n 在胎盤形成過程中的可能作用。方法 取妊娠 6～ 8 周絨 毛 8 0 份 ， 分離 、 培養(yǎng)細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞并經(jīng)光電鏡 、 免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定 ； 提取細(xì)胞 總 R N A ， 應(yīng)用逆轉(zhuǎn) 錄

3、聚合酶鏈反 應(yīng)( R T -P C R ) 技術(shù)測定滋養(yǎng)細(xì)胞 l e p f i nm R N A表達(dá)。結(jié)果 ①經(jīng)光電鏡、 免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定， 細(xì)胞角蛋白一 7 ( C K - 7 ) 染色強(qiáng)陽性，h c G 染色個別細(xì)胞弱陽性， v i m e n t i n 染色陰性， 表明分離培養(yǎng)的細(xì)胞為滋養(yǎng)細(xì)胞。②滋養(yǎng)細(xì)胞表達(dá) l e p f i nm R N A在 2 3 5b p 處 有區(qū)帶。結(jié)論 培養(yǎng)的早孕絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞表達(dá) l e p

4、 f i nm R N A ， l e p t i n 可能在胚胎著床、 滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤過程中起調(diào)控作用。關(guān)鍵詞 ： l e p t i n ； 滋養(yǎng)細(xì)胞 ； 著床 中圖法 分類號 ： R 3 2 1 ． 4 ； R 3 2 92 4 ； R 7 1 4 ． 1文獻(xiàn)標(biāo)識 碼 ： AEx p r e s s i o no fl e p t i nmRNA i nc u l t u r e dh u ma nv i l l o u st r

5、 o p h o b l a s t sa te a r l yp r e g n a n c yJ I A N GL i ． y a h ，L IZ h e n ，C H E N GY a ， C H E N1 3 o ． i i e ， Z H O N GX u — S U ，L I NG u i — l a n ，Y A N GG u i — f e n( D e p a r t m e n tO b s t e t r i c

6、sa n dG y n e c o l o g y ， X i n q i a oH o s p i t a l ，T h i r dM i l i t a r yMe d i c a lU n i v e r s i t y ，C h o n g q i n g4 0 0 0 3 7 ，C h i n a )A b s t r a c t ： O b j e c t i v eT oe x p l o r et h ep r o b

7、a b l ea c t i o no fl e p t i ni np l a c e n t ab yd e t e r m i n a t i n gt h ee x p r e s s i o no fl e p r i nmR N A i nt r op h o b l a s t s ．Me t h o d sC y t o t r op h o b l a s t sw e r e i s o l a t e df r

8、 o m 8 0c a s e so ft h ec h o r i o n i cv i l l ia t6—8 -w e e kp r eg n a n c y ，c u l t u r e di nv i t r o，a n do b s e r v e d b yl i g h ta n de l e c t r o nmi c r o s c o p ea n di mmu n o c y t o c h e mi s

9、t r y ．T o t a lR N A o ft r op h o b l a s t swa se x t r a c t e d ．T h ee x p r e s s i o no fl e p t i nm R NA i nt r op h o b l a s t swa sd e t e r mi n e db yr ev e r s et r a i l -s c r i p t i o np o l y m e r

10、 a s ec h a i nr e a c t i o n( R T - P C R ) ． R e s u l t sS t r o n g l yp o s i t i v es t a i n i n go fc y t o k e m t i n - 7 ， w e a k l yp o s i t i v es t a i n i n go f- h CGi ns omec e l s ，a n dn e g a t i v

11、 es t a i n i n go f v i me n t i nw e r e o b s e r ve d u n d e rl i g h ta n de l e c t r o nmi c r o s c o p ea ndi mmu n o c y t o c h e m i s t r y ，s u g g e s t i n gt he ywe r et r op h o b l a s t s ．L e p

12、t i nmR NA Wa s 2 3 5b p．Co n c l u s i o nT r op h o b l a st sf r o me a r l yp r e g na nc yC a n e x p r e s sl e p t i nm R N Aw h i c hm a yr e g u l a t ec y t o t r o p h o b l a s ti n v a si o ni nt h ep r o

13、 c e s so f e mb r y oi mp l a n t at i o n ．Ke yw0 r d s ：l e p t i n；t r o p h o b l a s t ：i mp l a n t at i o n瘦素( 1 e p t i n ) 是肥胖基因的產(chǎn)物， 主要 由白色脂肪細(xì) 胞分泌 ， 其它來源有胎盤、 胃腸等組織。作為I 型細(xì)胞因子參與體內(nèi)能量平衡 、 代謝等多種功能_ 】] 。近來 國外 研究 顯 示

14、 它還參 與胚 胎 著床 、 滋 養(yǎng)細(xì) 胞 的浸 潤 等過 程 。本實驗從人早孕絨毛中消化 、 分離 出細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì) 胞體外培養(yǎng) ， 用 R T ． P C R方法檢測細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞 中 l e p t i nm R N A的表達(dá)， 分析滋養(yǎng)細(xì)胞是否分泌 l e p t i n ， 為進(jìn)一步 研究 l e p t i n 在胚胎著床中的作用提供理論依據(jù)。1 材料與方法 i ． i 材料來源第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院、 西南醫(yī)院、 重慶市婦產(chǎn)科 醫(yī)

15、院門診 自愿實施 人工流產(chǎn) 的 6 —8 周 妊娠 婦女 ， 孕 齡 經(jīng) B超及 停經(jīng) 天數(shù)估算 ， 共 8 0 例。作者 簡介 ： 蔣 立艷( 1 9 6 6一) ， 女 ， 四川省 成都市 人 ， 碩 士， 主治 醫(yī)師 ， 主要 從事 生殖醫(yī)學(xué)方面 的研究 ， 發(fā) 表論文 6篇。電話 ： ( 0 2 0 ) 8 5 2 2 4 1 7 5通訊作者 ： 李 真 ， 電話 ： ( 0 2 3 ) 6 8 7 5 5 0 2 6 ， E

16、- m a i l ： d e n g l i @p u b l i c ． c t a ． c q ． c n收稿 日期 ： 2 0 0 3 - 0 7 - 0 8 ； 修 回 日期 ： 2 0 0 4 - 0 1 ． 1 21 ． 2 方 法 1 ． 2 ． 1人早孕絨毛細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞的分離培養(yǎng) 參照文獻(xiàn) [ 4 ] 。每次取 人工流產(chǎn) 6 ～ 8 周 妊娠 絨毛 1 0 份 ， 機(jī) 械法分 離 ， 酶 消化 ， 經(jīng) F i c o

17、 U 分 離介質(zhì)離心得 到單個核 細(xì)胞 ， 重懸 在 D M E M ／ F -l 2+1 0 ％胎牛血清 中( 細(xì)胞 密度 4 ×lc e孔 ) ， 接 種入 6 孔 細(xì) 胞培養(yǎng)板 中 ， 放入 3 7o C， 5 ％C ( ) 2 ～ 9 5 ％空氣 飽和 濕度 培養(yǎng)箱 中孵育 。孵 育 4 8h 棄上清 ， 換液再 孵育 2 4h 。1 ． 2 ． 2 細(xì) 胞鑒 定及純 度 分析 ①光 鏡 ： 倒置 顯 微鏡 下觀 察

18、 分離的細(xì)胞 滋養(yǎng)細(xì)胞并 照相 。② 電鏡 ： 取 分 離 、 純 化 的細(xì)胞 滋 養(yǎng)細(xì)胞 ， 3 ％戊二 醛固定后送透 射 電鏡 檢測 。③s - P 法 免疫 細(xì)胞 化學(xué)染色 ， 一抗 分 別為 C K - 7 、 v i m e n t i n 、 ~ - h C G ( 陰性 對 照 ： P B S替 代一抗) 鑒定分離所得細(xì)胞。圖像分析儀分析 C K - 7陽性細(xì)胞 數(shù) ， 用光 密度半定量 分析 法 ， 計 算著 色 細(xì)胞

19、的染 色強(qiáng) 度 及著 色 細(xì)胞數(shù) 占該類細(xì)胞總 數(shù)的百分 比測 定細(xì)胞純度 。1 ． 2 ． 3l e p t i nm R N A表 達(dá) 檢測 應(yīng) 用逆 轉(zhuǎn) 錄聚 合 酶鏈 反 應(yīng) ( R T - P C R ) 技術(shù) 檢測 ： ① 總 R N A提 取 ： 棄 去細(xì) 胞 培養(yǎng) 液 ， 室 溫下 每 l 0c I 1 1 2 細(xì)胞 生長面積 ( 不論細(xì) 胞數(shù) 量) 加 lm lT r i p u r e 分離試 劑 ， 按 照 T

20、r i p u e 試劑盒 ( 德 國 R o c h e 公 司產(chǎn) 品 ) 說 明書 ， 抽 提 、 分 相、 分離提取總 R N A ， 紫外分光光度計測定 R N A濃度、 純度符 合要求后 ， 進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。②c D N A合成： 反應(yīng)體系中按以下順序 維普資訊 http://www.cqvip.com 4 5 0第 三 軍 醫(yī) 大 學(xué) 學(xué) 報 第 2 7 卷 謝 、 生殖 、 血管生成等過程?。3 ． 2 早孕絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞 l

21、 e p t i nr n R N A表達(dá)及其意義 胚胎著床過程 中滋養(yǎng)細(xì)胞 的浸潤是其關(guān)鍵環(huán)節(jié) ，受到細(xì)胞 因子 、 粘 附分子 、 E C M和蛋 白水解 酶及 其組 織抑制物等多種 因素的調(diào)控。L e p t i n 作為 I型細(xì)胞 因子主要是 由白色脂肪細(xì)胞分泌 的蛋 白類 激素 ， 其它來 源有胎盤、 胃和骨骼肌bJ 。文獻(xiàn) [ 1 ] 報道在生殖系統(tǒng) 中 參與生殖 內(nèi)分泌、 月經(jīng) 、 生育周期及 妊娠、 泌乳等過程 并作為代

22、謝信號啟 動青 春期 。國外研究報道 l e p t i n 可 能也參與 了胚胎著床過程 的調(diào)控 j 。在本研 究中 ， 應(yīng) 用 R T - P C R技 術(shù)證 實 培養(yǎng) 的人 早 孕絨 毛滋養(yǎng) 細(xì)胞 有 l e p t i nm R N A表達(dá)。H o g g a r d等_ 9 ] 報道其轉(zhuǎn) 錄水平在早 孕期最高并隨妊娠進(jìn)展而遞減 。H e n s o n 等¨ 。 。 研究 l e p —t i n 受體在浸潤 的滋

23、 養(yǎng)細(xì)胞柱 遠(yuǎn)端絨毛外細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì) 胞 ( e x t r a — v i l l o u sc y t o t r o p h o b l a s t ， E V T ) 強(qiáng) 表 達(dá) ， 而 l e p t i nm R N A在滋養(yǎng)細(xì)胞柱的所有細(xì)胞成分均有表達(dá)。國外 學(xué)者 G o n z a l e z 等b發(fā)現(xiàn) l e p t i n影響 了 ( 2 2 ． 5- 6整合素亞單 位的表達(dá)及 M M P s 的活性改變 ； C a s

24、 t e l l u c c i 等 研究也 表明增 加 l e p t i n可使培養(yǎng) 的 C T B分泌 M M P - 2和 f F N ，并增加 M M P - 9的活性呈劑量依賴 。L e p t i n 和其受體結(jié) 合通過影響 M M P s 的分泌促進(jìn) E v T的浸潤。 目 前 的研 究顯示 l e p t i n參與了胚胎著床 、 滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤 的調(diào)控 ，但其作用機(jī)制 尚需進(jìn)一步研究。參考文獻(xiàn) ：[ 1 ]M a r

25、g e t i cS ， G a z z o l a C ， P e g gGG ， e to ／ ． kp： ar e v i e wo f i t sp e r i p h e r a l些 豈 矗 鑒 鯊鑫≤戔 鱉≤耋墨 騭耋 些 ： 毒毒鯊騭美： 鼉耋熹( 上 4 i - 4 4 7頁)威脅 。因此 ， H B s A g陽性 患者 的術(shù) 后 器 械 ， 應(yīng)盡 量 簡 化處 理程 序和減少與人的接觸 ， 并且做好必要的消毒滅菌

26、措施 ， 才能有 效控制醫(yī)院感染的發(fā)生。目前 ， 部 分 醫(yī)院 采用 清 洗 消 毒設(shè) 備 處 理使 用 后 的 醫(yī)用 器 材 ， 既可 高效 去處器 材表 面 的污 染物 ， 又可通 過 熱水 對器 材進(jìn) 行 消毒 ， 避 免 了頻繁 的手 工操 作 對工 作人 員 構(gòu)成 的感 染威 脅 。但是 ， 上述的監(jiān)測數(shù)據(jù)表明， 只通過清洗消毒器處理 H B s A g 陽性患者 的術(shù)后器械 ， 不 足 以去 除或 殺滅 H B V ， 而

27、污染 器械 在化 學(xué)消毒液短暫浸泡消毒后再用清洗消毒器處理， H B V則幾乎被 去 除或 殺滅 ， 這并非證實 清洗消 毒器 性能 差 ， 而是 因為 H B V是 一 種較 特殊 的親脂 病毒 ， 一方面具有 很強(qiáng) 的耐熱性 ， 能 在 1 0 0℃以下的的環(huán)境中存活( 絕大多數(shù)微生物存活的溫度都低于 印 o C ) ， 清洗消毒器內(nèi)熱水消毒的溫度未達(dá) 1 0 0o C， 不能將其有效 殺滅 ； 另一方 面 ， H B V對 化學(xué)消

28、毒 因子又特別 敏感 ， 很容 易被化 a c t i o n sa n di n t e r a c t i o n s[ J ] ．1 n lJO b e sR e l a tM e t a bD i s o r d ，2 O O 2 ， 2 6( 1 1 ) ： 1 4 0 7 —1 4 3 3 ．[ 2 ]M a s u z a k iH ， O g a w aY ， S ~ g a w aN ， e to 1 ． N o n

29、a d i p o s et i s s u ep r o d u c t i o no fl e p t i n ：l e p t i na san o v e lp l a c e n t a - d e r i v e dh o r m o n ei nh m n a n s [ J ] ．N a tM e d，1 9 9 7 ， 3 ( 9 ) ： 9 5 2 — 9 5 3 、[ 3 ]G o nz a l e z RR ，

30、D e v o t o L ， C m Ⅷ ) a n a A ， e to 1 ． E f e c t so f l e p t i n ， i n t e r l e u k i n -1 a l p h a , i n t e r l e u k i n - 6， a ndt r a n s f o r mi n gg r o w t hf a c t o r - b e t aO i lma r k e P so ft r o

31、p h o b l a s ti n v a s i v ep h e n o t y p e ： i n t e g r i n sa ndm e t a l l o p r o t e i n a s e s [ J ] ． E n d o —c r i n e ， 2 0 0 1 ， 1 5 ( 2 ) ： 1 5 7 —1 6 4 ．[ 4 ]C l a r s o nLH ， R o b e r t s VH， G r e e

32、 n w o o dS L ， e to 2 ． A T P - s t i m u l a t e d C a 2 ’ 一a ct i v a t e d Ke f l u xp a t h w a ya ndd i f e r e n t i a t i o no fh u ma np l a ce n t a lc y t o t r o —p h o b l a s tc e l l s 【 J ] ．A mJP h y s

33、 i o lR e g L dI n t e g rc 唧 P h y s i o l ， 2 O O 2 ， 2 8 2( 4 ) ：R 1 0 7 7—1 0 8 5 ．1 5JZ h a n gY，P l ~ e aR，M a f e iM， e ta ／ ．P o s i d u na lc l o n i n go ft h ei n o u s eo b e s eg e n ea n di t sh u m a nh o

34、m o l o g u e [ J ] ． N a t u r e ， 1 9 9 4 ， 3 7 2 ( 6 5 0 5 ) ： 4 2 5— 4 3 2．1 6 jI s s eN ， (w aY ， T a m u r aN ，e to ／ ． S t r u c t u r a lo r g a n i z a t i o na n dc h l o l l l O -s o m a la s s i g n m e n to

35、ft h eh u m a no b e s eg e n e [ J ] ． JB i o lC h e m ，1 9 9 5 ． 2 7 0( 4 6 ) ： 2 7 7 2 8 — 2 7 7 3 3 ．1 7 jC o h e nSL ，H a l a a sJL ，F(xiàn) r i e d m a nJM，e to 1．H u ma nl e p t i nc h a ca c t e r i z a —t i o n [ J ]

36、． N a t u r e ，1 9 9 6 ， 3 8 2 ( 6 5 9 2 ) ： 5 8 9 ．1 8 jC a s t e l u c c iM， D eM a t t e i sR ， M e i s s e rA ， e to ／ ． L e p t i nm o d u l a t e se x t r a c e l —l u la rma t r i xmo l e c u le s a n dme t a l l

37、 o p r o t e i m a s ~ ~：p o s s i b l ei mp l i c a t i o n sf o rt r o —p h o b l a s ti n v a s i o n [ J ] ． M o lH u mR e p r o d ， 2 O O 0 ， 6 ( 1 0 ) ： 9 5 1 — 9 5 8 ．[ 9 ]H o g g a r dN ， H u n t e rL ， l e aRG ，

38、 e to 1． O n t o g e n yo f t h ee x p r e s s i o n o fl e p —t i n a ndi t sr e c e p t o r i n t h en l u r i n e f e t u s a n dp l a c e n t a [ J ] ． B rJN u t r ， 2 O O O ，8 3 ( 3 ) ： 3 1 7 — 3 2 6 ．[ 1 0 ]H e n s

39、 o nMC ， S w a nKF ， O ’ N e i lJS ． E x p r e s s i o no fp l a c e n t a ll e p t i na n dl e p t i nr e c e p t o r t r a n s c r i p t si ne a r l yp r e g n a n c ya n d a tt e ~[ J ] ． O b s t e t G y n e —c o l ，

40、1 9 9 8 ， 9 2 ( 6 ) ： 1 0 2 0 —1 0 2 8 ．( 編輯 張大春)≤筵 矗鯊 矗 是套 瑩≤顯 矗 盤 姜蛙 美盞簍學(xué)消毒劑殺滅， 與化學(xué)消毒劑短暫接觸也可被有效滅活b ] 。由此可見 ， H B s A g 陽性患 者 的術(shù) 后 器 械 ， 應(yīng) 先在 化學(xué) 消 毒 劑 中滅 活后再進(jìn)行 常規(guī) 的清洗 和消毒 ， 才能取得較 滿意 的效果 。關(guān)鍵 詞 ： H B s A g ； 外科器 械 ； 消毒

41、中圖法分類號 ： R 1 8 7文獻(xiàn)標(biāo)識碼 ： B參考文獻(xiàn) ：[ 1 ]姚 磊， 周長邵， 張 征， 等． 4 4 8例乙肝標(biāo)志物不同模式血清循 環(huán) 免疫 復(fù)合物的檢測及臨床 意義[ J ] ． 第三軍醫(yī)大學(xué) 學(xué)報 ， 2 0 0 2 ， 2 4( 8 ) ： 8 6 8 ．[ 2 ]郝秀麗 ， 王 娟 ． 預(yù)防和控制乙肝在手術(shù)中的傳播[ J ] ． 海南醫(yī)學(xué) ，2 0 0 3 ， 1 4 ( 5 ) ： 8 8 — 8 9 ．[ 3