含硫氨基酸寡肽自組裝合成及其寡肽與DNA的相互作用研究初探.pdf

1、多肽是涉及生物體內(nèi)各種細(xì)胞功能的生物活性物質(zhì)，可以調(diào)節(jié)體內(nèi)各個(gè)系統(tǒng)和細(xì)胞的生理功能，激活體內(nèi)有關(guān)酶系，促進(jìn)中間代謝的通透性，或通過(guò)控制DNA轉(zhuǎn)錄或影響特異的蛋白合成，最終產(chǎn)生特定的生理效應(yīng)，發(fā)揮其藥理作用。因此，活性多肽的設(shè)計(jì)及合成，提供高純度的多肽樣品，篩選具有生物活性的寡肽分子在醫(yī)學(xué)、藥學(xué)及生物學(xué)等領(lǐng)域都具有十分重要的意義。 本文以電噴霧質(zhì)譜為檢測(cè)手段，較系統(tǒng)的研究了無(wú)機(jī)磷試劑POCl<,3>輔助下L-甲硫氨酸、L-半胱氨酸

2、、L-胱氨酸的自組裝成肽反應(yīng)。具體包括時(shí)間、溫度、溶劑等反應(yīng)條件對(duì)三種含硫氨基酸的成肽反應(yīng)的影響，三種含硫氨基酸混合成肽反應(yīng)及三種含硫氨基酸成肽活性對(duì)比分析。并借助電噴霧質(zhì)譜和電噴霧多級(jí)質(zhì)譜等現(xiàn)代分析手段，對(duì)單氨基酸肽庫(kù)及雜氨基酸肽庫(kù)進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，總結(jié)了三種含硫氨基酸多肽的電噴霧質(zhì)譜裂解規(guī)律。結(jié)果表明：一定溫度和溶劑條件下，L-甲硫氨酸、L-半胱氨酸、L-胱氨酸均可與三氯氧磷反應(yīng)生成不同長(zhǎng)度的寡肽；時(shí)間、溫度、溶劑等反應(yīng)條件對(duì)三種含硫

3、氨基酸的成肽反應(yīng)影響較大；三種含硫氨基酸與三氯氧磷反應(yīng)活性順序?yàn)椋喊腚装彼?甲硫氨酸>胱氨酸。甲硫氨酸和半胱氨酸與三氯氧磷反應(yīng)活性較高，成肽效果較好，二者與三氯氧磷在四氫呋喃中反應(yīng)轉(zhuǎn)化率較高，得到以二肽為主的寡肽混合物，胱氨酸與三氯氧磷反應(yīng)活性較低且在四氫呋喃中反應(yīng)轉(zhuǎn)化率很低，在寡肽的合成分離上意義不大；三種含硫氨基酸多肽的MS<'2>裂解規(guī)律非常相似，一般容易失去一分子水、一分子一氧化碳，然后脫去一系列氨基酸殘基，形成“b”型離子H(

4、ItNCHRCO)<,n><'+>和“a”型離子H(HNCHRCON)<,n-1>=CHR，符合多肽“b”型斷裂的典型特征。 通過(guò)控制POCl<,3>與L-甲硫氨酸、L-半胱氨酸反應(yīng)的條件，合成了以二肽為主的甲硫氨酸和半胱氨酸寡肽庫(kù)，利用反相高效液相色譜，以水．乙腈為流動(dòng)相，分別以C18和C8半制備柱作為甲硫氨酸和半胱氨酸寡肽庫(kù)的分離和制備柱，對(duì)分離條件進(jìn)行了優(yōu)化，分離和制備了甲硫二肽和半胱二肽。并借助ESI-MS、IR、<'1